行业标准：GBT 26938-2011 牛胚胎生产技术规程.pdf

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1、ICS65．020．30B43a园中华人民共和国国家标准GB／T26938--2011牛胚胎生产技术规程Standardforproductiontechnologyofbovineembryo2011-09-29发布2012-02-01实施宰瞀鹊鬻帮'1量-1：警矬赞星发布中国国家标准管理委员会仅19(；BIT26938--2011刖昌本标准的附录A为规范性附录，附录B、附录c、附录D为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC／TC274)归口。本标

2、准起草单位：内蒙古自治区家畜改良工作站。本标准主要起草人：高雪峰、张立、包呼格、韩锦龙、李忠书、陈巴特尔、黄春华、包和平、德庆、刘长海。GB／T26938--2011牛胚胎生产技术规程1范围本标准规定了供体牛的选择与饲养管理、超数排卵及配种、牛非手术冲胚及胚胎质量鉴定、胚胎的冷冻与保存等技术规程。本标准适用于牛体内胚胎生产技术操作。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本

3、标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4143牛冷冻精液GB／T5458液氮生物容器3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3．1供体牛donor可用于胚胎生产的母牛。4供体牛的选择与饲养管理4．1供体牛的选择条件4．1．1品种优良，符合品种外貌特征，生产性能好。4．1．2遗传性能稳定，谱系清楚。4．1．3年龄以14月龄至10岁为宜。4．1．4无流产史，产后空怀90d以上，有两次以上正常发情周期。4．1．5体质健壮，生殖器官和繁殖机能

4、正常，无遗传和传染性疾病。4．2供体牛的饲养管理4．2．1保持饲养环境卫生、温湿度适宜，避免应激反应。4．2．2制定合理的日粮配方。4．2．3满足清洁卫生的饮水需要。4．2．4超排前8周加强饲养管理，并适量补充维生素A、维生素D、维生素E和微量元素。5供体牛的超数排卵及配种5．1超数排卵5．1．1供体牛的同期发情处理5．1．1．1药品所用药品见附录A。1CB／T26938--20115．1．1．2同期发情方法5．1．1．2．1肌肉注射PG法第一次注射：在任意一天。第二次注射：在第一次注射后第11天。

5、第二次注射后24h～96h时观察发情。5．1．1．2．2CIDR法选定任意一天放人CIDR(含孕激素阴道栓)。5．1．2超数排卵方法以母牛自然发情、PG法发情或放CIDR之日作为发情周期第0天，在9d～13d中的任意一天开始注射FSH，每天早、晚各注射1次，间隔12h连续4d，递减注射。放CIDR的供体，在第8次注射FSH之后，取出CIDR。具体方法参见附录B。5．1．3重复超数排卵重复超排间隔时间一般为45d～60d，方法同5．1．2。5．1．4供体牛发情鉴定在第8次注射FSH之后，对超数排卵供体

6、牛，每隔6h观察一次，每次0．5h以上。以母牛稳定站立接受其他牛爬跨或直肠检查作为发情的准确时间。5．2配种5．2．1对种公牛的要求谱系清楚，检疫合格，遗传性能稳定，生产性能优良。5．2．2配种所需器材配种所需器材见附录A。5．2．3人工输精操作要求5．2．3．1母牛外阴部应经过清洗消毒。5．2．3．2输精枪应保持无菌。5．2．3．3冷冻精液质量符合GB4143的规定。5．2．4配种时间确认发情12h后，进行第一次输精，间隔12h进行第二次输精，每次输精1支～2支，共输精2次～3次。6牛非手术胚胎采

7、集殛胚胎质量鉴定6．1非手术胚胎采集6．1．1非手术胚胎采集所需主要器材非手术胚胎采集所需主要器材见附录A。6．1．2非手术胚胎采集所需药品非手术冲胚所需药品见附录A。6．1．3改进的磷酸盐缓冲液的配制改进的磷酸盐缓冲液(PBS)配方参见附录C。6．1．4非手术胚胎采集时间供体牛超排发情后7d士0．5d采集胚胎。6．1．5非手术胚胎采集步骤6．1．5．1将供体牛稳定，用2％利多卡因在荐椎和第一尾椎结合处或第一尾椎和第二尾椎结合处进行尾椎硬膜外麻醉，利多卡因用量宜每头5mL。6．1．5．2麻醉后将牛尾

8、固定，清除直肠宿便，阴部及外阴清洗消毒。6．1．5．3用扩宫棒扩张子宫颈，然后插入宫颈黏液器将黏液抽出，随后把带内芯的冲胚管慢慢插入子2GB／T26938--2011官角，当冲胚管到达子宫角弯曲处，拔出内芯5cm左右，再把冲胚管往子宫角前端推进，至冲胚管到达子宫角前端1／3～1／2处。6．1．5．4冲胚管先充一定气体，待确定气囊位置后，再充气至冲胚管固定为宜。6．1．5．5抽出冲胚管内芯。6．1．5．6连接冲胚管。6．1．5．7用50mL注射器每次吸取30mL～40m