实验一 实验基本技术操作.ppt

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1、实验一实验基本技术操作了解实验室规则及注意事项；学习常用仪器的使用方法和玻璃器皿的清洗、干燥方法；掌握常用生物化学分析方法——分光光度法；学习运动生物化学实验样品的采集与处理方法；学习记录试验结果和书写实验报告。一．实验目的课前预习保持安静注意观察爱护仪器注意安全随时记录撰写报告讲究卫生二、实验室规则及注意事项一般非计量玻璃仪器或粗容量一起的洗涤可先用刷子蘸取肥皂水及去污粉进行刷洗，再用自来水冲净至管壁不挂水珠，然后用去离子水或蒸馏水洗3遍，倒置在试管架上自然干燥或热风烘干。精密量器不能用去污粉或肥皂洗刷，用后应立即用自来水冲洗，沥干后，浸于

2、铬酸洗液中浸泡数小时，再分别用自来水及蒸馏水冲洗，干燥备用。过脏的器皿可先用重铬酸钾等洗液浸泡10min后，取出用大量自来水洗净，再用蒸馏水冲洗。蒸馏水的使用应遵循少量多次原则。三、常用玻璃器皿的使用及清洗四、移液枪的使用移液枪是移液器的一种，常用于实验室少量或微量液体的移取，规格不同，不同规格的移液枪配套使用不同大小的枪头，不同生产厂家生产的形状也略有不同，但工作原理及操作方法基本一致。移液枪属精密仪器，使用及存放时均要小心谨慎，防止损坏，避免影响其量程。移液枪的正确使用方法及其一些操作细节如下所述。（一）量程的调节在调节量程时，如果要从大

3、体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。2.枪头（吸液嘴）的装配在将枪头（pipettetips）套上移液枪时，将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。如果是多道（如8道或12道）移液枪，则可以将移液枪的第一道对准第一个枪头，然后倾斜地插入，往前后方向摇动即可卡紧。枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到

4、连接部分形成清晰的密封圈。移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下2－3毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。这时可以采取两种移液方法。一是前进移液法。用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。3.移液的方法二是反向移液法。此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的

5、时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。4.移液器的正确放置使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。5.维护保养时的注意事项如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60%的异丙醇，再用蒸馏水清洗，自然晾干。高温消毒之前，要确保移液器能适应高

6、温。校准是可以在20-25度环境中，通过重复几次秤量蒸馏水的方法来进行。使用时要检查是否有漏液现象。方法时吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。如果漏液，原因大致有一下几方面：枪头是否匹配；弹簧活塞是否正常；如果是易挥发的液体（许多有机溶剂都如此），则可能是饱和蒸汽压的问题。可以先吸放几次液体，然后再移液。五、采指血技术用75%酒精棉球消毒无名指末端指腹,然后用干棉球擦干手指。用一次性采血针，垂直刺破已消毒的指端(深约2～3mm，动作要快、准、狠)；挤出第一滴血，并用干棉球擦去，然后，用一次性吸血管吸取第二滴血至20μL刻度线以上一

7、点，用干棉球擦去吸血管外壁多余血液，调整血液至20μL刻度线。取血后用干棉球压针孔，直到出血停止。六、分光光度计的使用接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档。）根据所需波长转动波长选择钮。将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。比色完毕

8、，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。分光光度计使用注意事项该仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电