非细胞型生物课件.ppt

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1、chap3病毒和亚病毒§1病毒（Virus）§2亚病毒(subvirus)●病毒发现的历史Ivnowsky(1892):TMVBeijerinck(1898)：‘filterablevirus’Loeffler（1898）口蹄疫病毒Towort（1915）噬菌体非细胞生物：----真病毒----亚病毒：类病毒、拟病毒、朊病毒§1.病毒（真病毒）●病毒病毒是一类核酸和蛋白质等少数几种成分组成的超显微非细胞生物，本质是一种只含DNA或RNA的遗传因子，能以感染态和非感染态两种状态存在。病毒的分类：●寄主：动物病毒、植物病毒、噬菌体●遗传物质：DNA病毒、RNA

2、病毒、●形态：杆状(螺旋状）、多面体、复合型●病毒的特征1.形态极其微小2.无细胞构造的分子生物3.只含一种核酸4.高度的寄生性5.通过装配方式进行繁殖6.离体可保持长期的侵染活性7.对抗生素通常不敏感8.有些能够整合到寄主的基因组中●病毒与人类：1）病毒对人类健康的危害2）对人类生活的影响2）病毒作为分子生物学研究的工具：----DNA是遗传物质的证明（噬菌体感染实验）----遗传物质转移的载体(转染)----蛋白质工程（噬菌体展示技术)建议读物：H5N1型禽流感病毒（蓝色）正攻击红色细胞H:红细胞凝聚(血)素(Hemagglutinin),1—15个亚

3、型;N:神经氨酸(醇)酶,Neuraminidase1—9个亚型疯牛病HIV病毒的计量单位：nm病毒的基因组：Qβ：3个基因一、形态构造与化学成分（一、大小）（二）病毒粒子结构与组成壳粒：构成病毒外壳的形态亚单位。病毒粒子核心：由DNA或RNA构成核衣壳（基本构造）衣壳：由许多衣壳粒蛋白构成包膜（非基本构造）：由类脂和糖蛋白构成,有的带有刺突流感病毒刺突血凝素蛋白：与宿主唾液酸结合神经氨酸酶：帮助病毒进入宿主●病毒的群体形态1、包涵体（病毒）：昆虫病毒在宿主细胞内聚集而成的晶体结构。2、噬菌斑3、空斑4、枯斑（组织坏死）蚀（噬）斑测定（plaqueassa

4、y）：在生长的宿主表面，铺上细菌或动物病毒，在单层细胞上形成的蚀（噬）斑，可以认为由单个病毒增殖产生的。由此，可以通过蚀（噬）斑形成单位(pfu)来计算单位体积样品中病毒的数量。病毒感染性作为病毒数目测定的依据（三）病毒核酸（基因组）––dsDNA/ssDNAdsRNA/ssRNA––线状/环状，闭环/缺口环––单分子/双分子/三分子/多分子●HBV（人乙肝病毒）的缺口环正链为缺口环;负链密闭●多分子基因组（流感病毒）（四）噬菌体形态1、噬菌体的模式结构：T偶数噬菌体头部：颈部：尾部：尾鞘、尾管、基板、刺突、尾丝、●噬菌体形态二、病毒的繁殖方式（一）噬菌体

5、●烈性噬菌体感染后短时间内能连续完成繁殖过程而使宿主细胞裂解的噬菌体。●温和噬菌体感染后其基因组整合到宿主的基因组上，并随宿主基因组的复制而同步，而不引起宿主细胞的裂解的噬菌体。●繁殖过程（烈性噬菌体）：1）吸附：尾丝与宿主表面特异受体结合2）侵入：溶菌酶水解肽聚糖，核酸进入宿主细胞。3）增殖：控制细胞代谢系统，合成噬菌体的各种“部件”。增殖过程的3阶段：1）早期转录-翻译：2）次早期转录-翻译3）晚期转录-翻译4）成熟：自装配过程。5）释放：多种酶类作用，促进细胞裂解，释放子代噬菌体。●噬菌体的测定(效价的测定)效价:生物制品活性（数量）高低的标志，通常

6、采用生物学方法测定。噬菌体效价：又称噬菌斑形成单位（pfu）数,指每毫升试样中含有侵染性噬菌体的粒子数。●双层平板法技术要点：1.双层琼脂,2.半固体琼脂3.高浓度宿主细胞,4.倒上皿温度●双层平板法测定效价的优点1）弥补平板不平2）噬菌斑位于同个平面，较清晰3）上层为半固体培养基，有利噬菌体扩散●一步生长曲线（Debruck，1939）定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，用于反映各种噬菌体潜伏期、裂解期和裂解量的特征曲线。请设想病毒增殖过程群体数量的变化过程？1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞；2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌

7、体）；3、将上述混合物用培养物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放的噬菌体感染其它细胞；4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量进行计数）；5、以感染时间为横坐标，病毒的效价(噬菌斑数/ml)为纵坐标，绘制出病毒特征性的繁殖曲线；●实验步骤问题：1）在一个培养系统中，如何测定噬菌体数量？●裂解期：●平稳期：效价最高期●裂解量：每个受染细胞产生的噬菌体的总数。（平稳期pfu/受染细胞？）●潜伏期：(侵入到装配):隐悔期；胞内累积期●温和噬菌体溶原性（溶原现象）:温和噬菌体侵入宿主后并不引起宿主细胞裂解的现象称之。溶原菌：受温和噬菌体感染的宿

8、主称之为溶原菌。前噬菌体：整合在宿主基因组上的温和噬菌体的核酸。●