基因工程基本操作程序II.ppt

《基因工程基本操作程序II.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、山东省青州市第二中学顾峰基因工程的基本操作程序Ⅱ预习学习内容（一）1.目的基因基因表达载体导入受体细胞检测与鉴定2.从基因文库中提取目的基因利用PCR技术扩增目的基因人工合成目的基因3.目的基因启动子终止子标记基因（二）1.转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微2.DNA分子杂交分子杂交技术抗原—抗体杂交预习自我检测1-4ADCB学习目标1.写出基因工程的四个操作步骤2.解释基因文库、基因组文库、部分基因文库的区别与联系3.分析基因工程四个步骤的原理、工具及具体的操作程序基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建目的基因导入受体细胞目的基因检测

2、与鉴定第一步第二步第三步第四步基因表达载体的组成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因1.转化:合作探究1.将目的基因导入受体细胞2.常用的受体细胞：动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等3.将目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。且侵染途径，且因受体细胞的不同而不同。目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达①农杆菌转化法方法—1.导入植物细胞（见教材P12“生物技术资料卡”

3、）②基因枪法③花粉管通道法显微注射分裂分化移植发育2.导入动物细胞含目的基因的表达载体动物的受精卵含目的基因的受精卵早期胚胎雌性动物输卵管或子宫转基因动物问题为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？显微注射技术3.导入微生物细胞繁殖快、单细胞、遗传物质少大肠杆菌（E.coli）1.过程Ca2+处理法用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子2.原核生物特点3.常用受体细胞☆思考回答1.为什么基因工程科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞？☆思考回答2.为什么要用Ca2＋处理细胞？繁殖快、遗传物质相对较少、操

4、作简单、价格低廉。因为大肠杆菌等细菌的细胞壁成分主要是肽聚糖，因此一般要先用Ca2＋处理，以增加细菌细胞壁的通透性。方法导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——Ca+处理法将目的基因导入受体细胞合作探究2.目的基因的检测与鉴定目的基因是否真正插入受体细胞的DNA中，是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达，只有通过检测、鉴定才能得知。常用的检测手段主要从分子水平和个体水平进行。类型检测内容方法结果显示分子检测目的基因是否进入受体细胞目的基因是否转录出mRNA目的基因是否翻译出蛋白质包括抗虫、抗病的_______实

5、验，以确定是否有______________________的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等个体水平定鉴DNA分子杂交显示出杂交带分子杂交技术显示出杂交带抗原—抗体杂交显示出杂交带接种抗性以及抗性目的基因的检测与鉴定—检查是否成功适当限制酶切割用同位素标记的目的基因片段杂交1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因提取受体生物全部DNADNA片段显出杂交带（表明目的基因已插入）DNA分子杂交技术用同位素标记的目的基因片段杂交2.检测目的基因是否转录出了mRNA提取受体生物的mRNA显出杂交带（表明目的基因已转录出了mR

6、NA）特别提醒：检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。分子杂交技术☆思考回答3.β—珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的β—珠蛋白，想一想，应该如何设计？1.从鼠体内提取β—珠蛋白的基因2.β—珠蛋白的基因表达载体的构建3.β—珠蛋白的基因导入大肠杆菌4.β—珠蛋白的基因的检测和鉴定跟踪训练1.将目的基因导入微生物细胞之前，要用Ca2＋处理细胞，处理过的细胞叫（　　）A.感受态细胞B.敏感性细胞C.吸收性细胞D.接

7、受细胞跟踪训练2.科学家通过基因工程的方法，能使大肠杆菌产生人的胰岛素。以下叙述错误的是（）A.可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒B.导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达C.DNA连接酶和限制性核酸内切酶都是构建重组质粒必需的工具酶D.目的基因的检测与鉴定表达过程中没有发生碱基互补配对AD跟踪训练3.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（　　）①检测受体细胞是否有目的基因　②检测受体细胞是否有致病基因③检测目的基因是否转录mRNA④检测目的基因是否翻译蛋白质A

8、．①②③B.②③④C.①③④D.①②④C归纳:基因工