皮上划痕用鼠疫活疫苗.doc

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1、皮上划痕用鼠疫活疫苗PishangHuahenyongShuyiHuoyimiaoPlagueVaccine（Live）forPercutaneousScarification本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防鼠疫。1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2制造2.1菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。2.1.1名称及来源采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株。2.1.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”

2、的有关规定。2.1.3种子批的传代工作种子批菌种启开至疫苗生产，传代应不超过3代。2.1.4种子批菌种的检定2.1.4.1培养特性在琼脂平皿上，35～37℃培养44～48小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉汤透明。2.1.4.2染色镜检涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。2.1.4.3生化反应发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气（附录ⅩⅣ）。2.1.4.4噬菌体裂解试验将EV菌种涂于琼脂平皿上，加入稀释度为10-6以上的鼠疫噬菌体1滴，于28℃培养44～48小时，噬菌

3、体流过处应无本菌生长。2.1.4.5特异性毒性试验选用体重300～400g豚鼠3只，每只皮下注射含菌1.2×1010（于28～30℃培养44～48小时）的培养物。在注射后第6天解剖1只，第21天解剖2只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。2.1.4.6免疫力试验选用体重200～250g的豚鼠10只，每

4、只皮下注射含菌7.0×105（于28～30℃培养44～48小时）的培养物，于20～25天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌200MLD。同时用3组豚鼠作对照，每组3只，各组豚鼠分别皮下注射0.5MLD、1MLD及2MLD的毒菌。免疫组及对照组至少观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，免疫力试验为合格。2.1.5种子批保存种子批应冻干保存于8℃以下。2.2原液2.2.1生产用种子2.2.1.1第1代菌种将工作种子批菌种启开后，接种于厚金格尔琼脂培养基上，于2

5、8～30℃培养44～48小时为第1代，置2～8℃保存可使用15天。2.2.1.2第2代菌种用生理氯化钠溶液将第1代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第2代，培养物经肉眼纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。由此制备适宜数量的生产用种子。2.2.1.3第3代菌种在第2代菌种不够的情况下，用生理氯化钠溶液将第2代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第3代，培养物经肉眼纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。由此制备适宜数量的生产

6、用种子。2.2.2生产用培养基采用厚金格尔琼脂培养基（pH6.8～7.2）或经批准的其他培养基。2.2.3菌种接种和培养将第2代或第3代生产用种子接种2.2.2项培养基上，于28～30℃培养44～48小时后，逐瓶肉眼检查，有杂菌者废弃。2.2.4采集合并用由蔗糖、明胶、硫脲、味精及尿素组成的稳定剂洗下菌苔（洗菌前弃去凝固水）或将菌苔刮入上述稳定剂内，进行纯菌试验，合格后方可合并制成原液。2.2.5原液检定按3.1项进行。2.3半成品2.3.1配制根据3.1.2项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每1ml含菌1.6×1010。2

7、.3.2半成品检定按3.2项进行。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2分装与冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。2.4.3规格按标示量复溶后每瓶0.5ml（10次人用剂量），含菌8.0×109；按标示量复溶后每瓶1.0ml（20次人用剂量），含菌1.6×1010。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。2.4.4包装应符合“生物制品包装规程”规定。3检定3.1原液检定3.1.1纯菌检查按附录ⅫA方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫

8、EV菌株特征，不得有杂菌。3.1.2浓度测定用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法或其它方法测定浓度。3.2半成品检定纯菌检查按3.1.1项进行。3.3成品检定除水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项检定。3.3.1鉴别试验按2.1.4.4项进行。3.3.2物理检查3.