行业标准：DB33T 994-2015 西瓜品种枯萎病抗性评价技术规范.pdf

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1、ICS65.020B15DB33浙江省地方标准DB33/T994—2015西瓜品种枯萎病抗性评价技术规范Technicalspecificationforevaluatingresistanceofwatermelonagainstfusariumwiltdisease2015-09-25发布2015-10-25实施浙江省质量技术监督局发布DB33/T994—2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则编写。本标准由浙江省农业厅提出。本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所、浙江省农业科学院农产品质量标准

2、研究所、浙江省农药检定管理所。本标准主要起草人：王汉荣、杨桂玲、王连平、方丽、陆剑飞、孙彩霞。IDB33/T994—2015西瓜品种枯萎病抗性评价技术规范1范围本标准规定了西瓜品种枯萎病抗性评价技术的术语和定义、鉴定方法、病情调查与判定。本标准适用于西瓜品种枯萎病抗性鉴定和抗性评定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1抗病性diseaseresistance植物所具有的能够克服或减轻病原物致病作用的可遗传性状。2.2抗性评价resistanceevaluation根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2.3致病性pathogenicity

3、病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。2.4病情级别diseaserating人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。2.5病原分离物pathogenisolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的、在特定环境条件下培养的病原物。2.6接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。1DB33/T994—20152.7接种液inoculumsuspension用于接种的、含有接种体的悬浮液。2.8发病率rateofinfected发病西瓜植株数占总西瓜植株数的百分率。2.9病情指数diseaseindex(DI)通过对植物个体发病程度（病情级别）

4、数值的计算获得的群体发病程度的数值化描述形式，是描述发病严重度的综合指标。3鉴定方法3.1基本设备恒温箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、可控温的温室（温度保持在20℃～28℃）、塑料盆、铝锅、电炉、培养皿、试管、剪刀、镊子、广口瓶、酒精灯、滤纸、三角瓶、恒温振荡箱培养等。3.2培养基制作3.2.1PDA培养基配方为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂17g，加蒸馏水至1000ml。按培养基配方称取去皮马铃薯200g，切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，弃滤渣，取滤液补充水分到1000ml；把滤液放入锅中，加入

5、葡萄糖20g，琼脂17g，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻璃棒不断搅拌，待琼脂完全溶解后，再补充水分至1000ml，调pH值至6.8～7.0。将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞或泡沫塑料塞后，再在塞子外包一层牛皮纸，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。试管的分装量为其高度的1/5，灭菌后制成斜面；三角瓶的分装量以不超过其容积的一半为宜，灭菌后倒入灭菌培养皿，制成平板培养基。3.2.2PL液体培养基配方为马铃薯200g、乳糖20g、加蒸馏水至1000ml。按培养基配方称取去皮马铃薯200g，切成小块放入锅中，加水1000ml，

6、在加热器上加热至沸腾，维持30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，弃滤渣，取滤液补充水分到1000ml；把滤液放入锅中，加入乳糖20g，用玻璃棒搅拌后放在石棉网上，小火加热至沸腾，再补充水分至1000ml。将配制的培养基分装入500ml三角瓶内，在三角烧瓶口上塞上棉塞或泡沫塑料塞后，再在塞子外包一层牛皮纸，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期后湿热灭菌。三角瓶的分装量以不超过其容积的一半为宜。3.2.3绿豆液体培养基2DB33/T994—2015配方为绿豆40g、氯化钠8g，加蒸馏水至1000ml。按培养基配方称取绿豆40g，放入锅中，加蒸馏水1000ml，在加热器上加

7、热至沸腾，维持30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，弃滤渣，取滤液补充水分到1000ml；把滤液放入锅中，加入氯化钠8g，用玻璃棒搅拌后放在石棉网上，小火加热至沸腾，再补充水分至1000ml。将配制的培养基分装入500ml三角瓶内，在三角烧瓶口上塞上棉塞或泡沫塑料塞后，再在塞子外包一层牛皮纸，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期后湿热灭菌。三角瓶的分装量以不超过其容积的一半为宜。3.3病原物的准备3.3.1病原物分离与保存取西瓜发病植株茎部病变的维管束组织，用常规组织分离法分离枯萎病病原物。分离物经形态学或分子生物学鉴定以