行业标准：DB37T 3824.4-2019 青贮饲料质量检测与评价技术规范 第4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程.pdf

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1、ICS65.120B46DB37山东省地方标准DB37/T3824.4—2019青贮饲料质量检测与评价技术规范第4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程Technicalspecificationforsilagequalitytestingandevaluation—Part4:Technicalregulationofmycotoxindetectioninsilage2019-12-24发布2020-01-24实施山东省市场监督管理局发布DB37/T3824.4—2019前言DB37/T3824—2019《青贮饲料质

2、量检测与评价技术规范》分为4个部分：——第1部分：全株玉米制作青贮饲料机械揉搓质量评价技术规范；——第2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定；——第3部分：多功能饲草粉碎机作业质量技术规范；——第4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程。本部分为DB37/T3824—2019的第4部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本部分由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本部分起草单位：山东省畜牧总站、山东五征高北农牧机械有限公司、德州农慧农牧专业合作联合社、东营市畜牧兽医工作

3、站、山东芳华农业机械有限公司。本部分起草人：翟桂玉、刘栋、姜慧新、王兆凤、曹阳、刘刚、张文娟、仲崇岳、纪中良、王志坚、郭爱华、张磊、王玉霞。IDB37/T3824.4—2019青贮饲料质量检测与评价技术规范第4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程1范围本标准规定了青贮饲料中霉菌毒素的酶联免疫吸附检测和高效液相色谱检测的方法、步骤和技术要求。本标准适用于青贮饲料中的霉菌毒素的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包

4、括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18980乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法GB/T28716饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化-高压液相色谱法GB/T28718饲料中T2毒素的测定免疫亲和柱净化-高压液相色谱法3术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1酶联免疫吸附法enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA利用抗原抗体反应原理，将已知抗原吸附在酶标板上，加入酶标记抗体和样品提取液并混合均匀，充分反应后用去离子水洗去多余抗体，再加入酶的底

5、物，产生有色物质，最后加入终止液使反应终止，用酶标仪测定酶底物的降解量，参照标准曲线计算试样中的抗原量。3.2高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC试样中各组分在色谱柱的流动相和固定相间分配系数不同，在色谱柱中运行时，会反复多次吸附－脱附－放出，经过一定柱长后，彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，4在记录器上描绘出各组分的色谱峰。高压液相色谱是把流动相改为高压输送，最高输送压力达3.5×10kPa，色谱柱用小粒径的填料填充的色谱分析方法。

6、4酶联免疫吸附技术4.1试剂本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。1DB37/T3824.4—20194.1.1甲醇。4.1.2石油醚。4.1.3三氯甲烷。4.1.4无水乙醇。4.1.5乙酸乙酯。4.1.6二甲基甲酰胺。4.1.7四甲基联苯胺（TMB）。4.1.8吐温-20。4.1.930%过氧化氢（30%H2O2）。4.1.10抗T-2毒素单克隆抗体与辣根过氧化酶结合物。4.1.11抗原。霉菌毒素与载体蛋白-牛血清白蛋白的结合物。4.2ELISA缓冲液系统4.2.1包被缓冲液为pH9.

7、6的碳酸盐缓冲液，称取1.59g碳酸钠（Na2CO3），2.93g碳酸氢钠（NaHCO3），加水稀释至1000mL。4.2.2洗液为含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液（简称为PBS-T），配制方法为：称取磷酸二氢钾（KH2PO4）0.2g，磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）2.9g，氯化钠（NaCl）8.0g，氯化钾（KCl）0.2g，吐温-200.5mL，加水至1000mL。4.2.3底物缓冲液为pH5.0的磷酸－柠檬酸缓冲液，配制方法为：——甲液：0.1mol/L柠檬酸（C6H8O7•H2O），

8、即称取柠檬酸19.2g，加水至1000mL；——乙液：0.2mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4），即称取磷酸氢二钠71.7g，加水至1000mL；——取甲液24.3mL，乙液25.7mL，加水至100mL，即可。4.2.4底物溶液：取50μLTMB（10mgTMB溶于1mL二甲基甲酰胺中）溶液＋10mL底物缓冲液＋10μL30%