质粒提取操作步骤.pdf

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1、SanPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒产品编号：SK8191/SK8192包装规格：50次/100次试剂盒组成组分SK8191，50次SK8192，100次纯化套件（吸附柱+收集管）50套100套BufferP114ml28mlBufferP214ml28mlBufferP320ml40mlBufferDW125ml50mlWashSolution12ml24mlElutionBuffer5ml10mlRNaseA2.1mg4.2mgVisualLyse60μl120μl操作手册1份1份保存方法及注意事项试剂盒于常温运输，未开启的试剂盒可以

2、于室温（15~25°C）保存，有效期见包装。加入RNaseA后，BufferP1请存放于2~8°C，有效期为半年。其他组分可于室温存放一年，长期存放请置于2~8°C。BufferP3和BufferDW1中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。产品介绍SanPrep柱式质粒小量抽提试剂盒是生工生物工程（上海）股份有限公司最新研制成功的一种质粒小量抽提试剂盒。本产品采用了一种新型的吸附材料，新吸附柱拥有良好的流速、超强的D

3、NA结合能力和优秀的洗脱效率。改良的配方使试剂盒的菌液裂解能力、DNA与吸附柱的结合能力大大加强，新型裂解染料VisualLyse的加入让裂解过程变得可视、可控，实现质粒得率最大化。对于高拷贝质粒，从6ml过夜菌液（OD600=2.0）中可以获得超过35μg的质粒DNA。操作过程快速、方便，无需使用酚/氯仿抽提，无需乙醇沉淀，整个抽提过程可以在20分钟内完成。由本试剂盒抽提得到的质粒纯度高，OD260/OD280比值一般为1.8~1.9之间，OD260/OD230比值大于2.0，可直接用于转化、DNA测序、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶

4、切等后续实验。快速操作流程（质粒提取）1.准备工作。检查BufferP1中是否已经加入RNaseA。检查WashSolution中是否已经加入乙醇。检查BufferP2和P3是否出现沉淀。菌体收集2.取1.5-5ml过夜培养的菌液，8,000×g离心2分钟收集菌体，弃尽培养基。3.在沉淀中加入250μlBufferP1，彻底悬浮菌体。4.加入250μlBufferP2，立即温和颠倒离心管5-10次混匀。室温静置2-4分钟。裂解5.加入350μlBufferP3，立即温和颠倒离心管5-10次混匀。6.12,000×g离心5-10分钟。将上清液移入

5、吸附柱，8,000×g离心30秒，倒掉收集管中液体。上柱7.（选做）加入500μlBufferDW1，9,000×g离心30秒，倒掉收集管中液体。8.加入500μlWashSolution，9,000×g离心30秒，倒掉收集管中液体。9.重复步骤8一次。洗涤10.空吸附柱于9,000×g离心1分钟。11.将吸附柱放入一个干净的1.5ml离心管中，在吸附膜中央加入50-100μlElutionBuffer，室温静置1分钟后，离心1分钟。保存管中DNA溶液。洗脱试剂准备1.自备材料：小型高速离心机（最大离心力≥12,000×g）、1.5ml离心管、

6、无水乙醇等。2.试剂盒初次开启，取1mlBufferP1至标有RNaseA的离心管中，吸打混匀后将其全部加入BufferP1中，混匀后在瓶身做好标记。储存于2~8°C，有效期为6个月。3.按瓶身标签说明在WashSolution中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。4.每次使用前请检查BufferP2和BufferP3是否出现沉淀，如有沉淀，请于37°C溶解沉淀，待冷却至室温后使用。标准抽提步骤1.在含合适抗生素的培养基中接种目标菌株，于37°C摇床充分振荡培养12~16h。菌液状态对质粒得率非常

7、关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。处于生长平台期的菌体用于质粒抽提得率最高，过度培养可能导致DNA降解。2.对于高拷贝质粒，取1.5-5ml菌液，于室温，8,000×g离心2min收集菌体，倒尽或吸干培养基。对于高拷贝质粒，从5ml过夜菌液中通常可以获得超过20μg质粒DNA，不推荐使用更大的菌液量。对于低拷贝质粒，如果使用更多的菌液，则同一个样品分多管收集，每管不超过5ml，分别裂解，合并同一个样品的各管裂解液通过同一个吸附柱来获得更高的得率。3.在菌体沉淀中加入250μlBufferP1，吸打或振荡至彻底悬浮菌体。

8、BufferP1首次使用时请检查是否已加入RNaseA。一定要彻底悬浮菌体，否则影响得率和质量。如果使用VisualLyse，则在加入250μlP