盐酸吉西他滨含量测定方法验证方案.doc

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1、医药开发验证方案方案#：PD修正：000有效日期：题目：ATP0603原料及产品含量测定方法验证方案改动历史日期修正改动备注08/03/24000原始草稿1目的对ATP0603原料及产品含量测定方法的可行性进行验证。2验证项目验证方法的线性、范围、准确度、精密度（重现性和中间精密度）、专一性及溶液稳定性。3含量测定方法盐酸吉西他滨含量测定方法采用WS1－(X-448)－2003Z方法（见附件）进行检测，方法如下：3.1试剂下面列出的或相当的级别盐酸吉西他滨标准品AR级甲醇HPLC级醋酸铵AR级冰醋

2、酸AR级纯化水HPLC级3.2色谱条件仪器：HPLC系统带自动进样，柱温控制和紫外检测器色谱柱：AlltechC184.6×250mm,5mm流动相：0.05mol/L醋酸铵缓冲液pH5.7：甲醇＝90：10（v/v）流速：1.0mL/minUV检测器268nm进样量：20μl4验证内容4.1线性和范围按含量测定方法配制贮备溶液，并分别稀释成50%、75%、100%、125%、150%水平，每份样品进样3次。举例：精密盐酸吉西他滨标准品100.0mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇

3、匀即得1.00mg/g贮备溶液。精密移取贮备液1.0ml至10ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀即得100%浓度水平的溶液。在样品配制浓度±50%范围内成线性，R应不小于0.999。4.2准确度按含量测定方法配制浓度水平为50%、75%、100%、125%、150%的溶液，100%浓度水平的配制6份，其余浓度水平的各配制三份，每份进样一次测定回收率。举例：精密盐酸吉西他滨标准品10.0mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得100%浓度水平的溶液。计算公式：回收率%=Ccal×1

4、00CrealCcal测得含量，mg/gCreal实际含量，mg/g回收率范围应在98.0%~102.0%。每个浓度水平含量测定结果的RSD应不超过2.0%。以测得含量为纵坐标，实际含量为横坐标作图（无需强制过零点），R2应不小于0.998。4.3重现性按含量测定方法配制浓度水平为100%的溶液6份并检测含量(可使用准确度实验所配制的溶液)。6份样品的含量检测结果的RSD不超过2.0%。4.4中间精密度实验室另一化验员按含量测定方法配制浓度水平为100%的溶液测定含量。6份样品的含量测定结果的RS

5、D应不超过2.0%，两个化验员含量测定结果的平均值的RSD不超过2.0%。4.5专一性按含量测定方法分别配制空白溶液、添加剂溶液、掺杂了已知杂质的标准溶液各一份，每份进样一次。色谱图上不应出现任何可能干扰含量测定的杂质峰。溶剂峰与标准物质峰的分离度如果小于1.5，则溶剂峰面积不得超过标准物质峰面积的0.05%。4.6溶液稳定性APT0603产品需在酸、碱、加热、氧化及光照条件下测试其稳定性。参考以下表格配制溶液：对照组移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀

6、。酸移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入2.5ml2M盐酸，室温放置1小时，加入2.5ml2MNaOH，加水定容至刻度，摇匀。碱移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入2.5ml2MNaOH，放置24小时，加入2.5ml2M盐酸，加水定容至刻度，摇匀。氧化移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入2.5ml6%H2O2，室温放置1小时，加水定容至刻度，摇匀。加热移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加入

7、约8ml水，将容量瓶置于80℃水浴锅中恒温7天。待容量瓶冷却至室温后加水定容至刻度，摇匀。光照移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加适量水，以200W/m2的紫外光照射至少9小时，再以可见光照射22小时，加水定容至刻度，摇匀。光照对照组移取1.0ml1.00mg/g的贮备溶液至10ml容量瓶中，加适量水，以铝箔包裹容量瓶，以200W/m2的紫外光照射至少9小时，再以可见光照射22小时，加水定容至刻度，摇匀。按含量测定方法配制浓度水平为100%的标准溶液和供试品溶液，分别于室

8、温和4℃放置，在一定时间间隔进样检测确认溶液的稳定性。稳定度%=CDay-x×100CDay-0Cday-x第X天测得含量，mg/gCday-0第0天测得含量，mg/g稳定度在98.0%~102.0%之间则可认定溶液是稳定的。