标准的PCR实验室设计规划方案.doc

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1、标准的PCR实验室设计规划方案PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。用于基因检测，具有高度敏感性、特异性、快速、简单等特点，能将传统方法难以检测的极少数病毒DNA片段扩增百万倍以上，从而大大提高疾病的诊断水平。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的地方。又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。　　未名雷蒙特告诉你标准的PCR实验室设计规划方案：　

2、　1、PCR实验室平面布局　　PCR扩增检验实验室原则上分为三个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增和扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增和扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。　　2、实验室空调通风系统设计及压力控制　　PCR实验室并没有严格的净化等级要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。　　（1）试剂贮存和准备区　　该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂

3、的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制，本区应对外界保持微正压。　　（2）标本制备区　　该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。　　（3）扩增和扩增产物分析区　　该区域主要进行的操作为DNA扩增和扩增片段的测定。此外，已制备

4、的DNA模板（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。　　3、污染的预防与控制　　PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不

5、但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。　　（1）工作区域的严格划分　　各个实验区域设置合理；各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。　　（2）合理的系统设置　　合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。　　（3）规范的操作　　扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措

6、施；清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。　　（4）严格的管理　　严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性；扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应

7、特别注意实验人员的安全防护。　　（5）完备的实验室配套设施　　完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。　　疾控中心PCR实验室基本要求　　1、PCR实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室，有上述前面三个区域即可。各区域应完全独立分隔，不应有任何的空气直通。　　2、产物分析区或三个区域的最后一个区域（即扩增及产物分析区），空气流向