辐照灭菌确认方案.doc

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1、#####有限公司研发部###辐照灭菌确认方案验证方案审批表一、验证方案拟订表方案起草人方案起草日期二、验证方案审核审核人（签名）日期三、验证方案批准批准人（签名）：批准日期：年月日方案执行日期：年月日四、验证执行小组成员成员签名组长副组长小组成员目录1.主要内容和适用范围2.辐照剂量测定2.1原理1.1选择SAL和获得产品样品1.2测定初始污染菌1.2.1初始污染菌的计算1.2.2初始污染菌的测定1.2.3校正系数的测定1.2.4产品释出物的检验1.3建立验证剂量1.4完成验证剂量实验1.5建立灭菌剂量2.辐照灭菌加工确认3.验证总结报告书####辐照灭菌确认方案1．

2、主要内容和适用范围本文对于###的灭菌确认过程做了详细描述，确认的内容包括辐照剂量的设定及辐照加工确认。本方案制定的目的在于证实产品辐照符合ISO11137-2006的要求，灭菌后的产品能达到10-6的无菌保证水平。2．辐照灭菌剂量设定2.1原理验证的原理是基于ISO11137方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定存活微生物的样品件数，以此来确定最低灭菌剂量（SAL=10-6）。2.2选择SAL和获得产品样品该产品的SAL选定为10-6，收集常规生产的标准包装产品，于灭菌前对三个批号进行随机抽样，每批至少抽取10

3、个样品，其中取样比例（SIP）为1。2.3测定初始污染菌2.3.1初始污染菌的计算测定至少30个样品单元的每件样品的初始污染菌并计算，a)三批中的每一批的平均的单元产品初始污染菌（批平均），和b)所有的单元产品平均初始污染菌（总平均初始污染菌）。ISO11137-2006或GB/T18280-2007中，7.2.1.3.2测定至少30个样品单元的每件样品的初始微污染菌并计算：批平均值和总平均值。当初始污染菌较低（如小于10）；允许集中检测单独一批中10个单元产品来确定批平均初始污染菌。将三批产品的每批平均初始污染菌与总平均初始污染菌比较，确定是否有一批平均值是总平均值的

4、两倍或两倍以上。确定初始污染菌测定中是否提供了校正因子，建立测定校正因子的方法。2.3.2初始污染菌测定测定依据：ISO11737-1：1995试验方法：（平板计数法）1)洗脱液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。2)样品处理：取样品10cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，浸泡，振摇，作为1:10的供试液。3)需气菌培养：取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基

5、，混匀，凝固，倒置培养。4)霉菌培养：取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的玫瑰红钠培养基，混匀，凝固，倒置培养。5)计数：除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一般以48小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养72小时，逐日点计菌落数，一般以72小时的菌落数报告；必要时，可适当延长培养时间至5～7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。结果：批号样品号需气菌(cfu/件

6、)霉菌(cfu/件)需气菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)需气菌(cfu/件)霉菌(cfu/件)12345678910平均数批平均初始污染菌为（cfu/件）总平均初始污染菌为（cfu/件）2.3.3校正系数的测定根据ISO11737-1中描述的初始污染菌的确定方法进行试验，测定校正因子，该因子取自对活菌计数的初始污染菌检测技术的验证。测定依据：ISO11737-1:1995试验方法：1）标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372），传代培养，制成100cfu/ml备用。2）洗脱液准备：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23

7、g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。3）制备悬液稀释液，使0.1ml中含有100个芽孢。向随机抽取的10个产品上接种0.1mL该稀释悬液，并在层流下进行干燥。4）用洗脱液对接种的产品进行洗脱，测定洗脱的芽孢数，并计算平均值。100除以平均芽孢数即为回收率的校正系数。样品编号12345678910芽孢数平均芽孢数：校正系数：2.3.4产品释出物的检验测定依据：ISO11737-1：1995试验方法：1)标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）,白色念珠菌（ATCC10231），传代