盐水凝聚胺介质交叉配血试验.doc

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1、一盐水介质交叉配血试验1.原理盐水介质配血法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。本试验主要用以检测受血者（献血者）血清（浆）中有无破坏献血者（受血者）红细胞的抗体。如存在相应的抗体，则交叉管中将发生凝集或溶血现象，此即为交叉不合，反之则交叉相合。2.操作（单位：滴）主侧管次侧管混合管受血者血清（浆）21受血者5%红细胞悬液11献血者血清（浆）21献血者5%红细胞悬液11混匀，1000~2000rpm×1~2分钟离心，观察结果。3．结果观察3.1主、次、混合管均无凝集，无溶血

2、现象，示无配血禁忌，继续下一步进行聚凝胺法或抗人球蛋白法。3.2主、次、混合管均有凝集和/或溶血现象，示有配血禁忌，需进一步核查，寻找原因。3.3主、混合管有凝集和/或溶血现象，示有配血禁忌，需进一步检查，寻找原因。次、混合管有凝集和/或溶血现象，示有部分配血禁忌，需进一步检查，寻找原因。4．注意事项4.1结果观察时，除肉眼观察外，均需显微镜观察。4.2要注意真、假凝集的鉴别。二凝聚胺试验1.原理：凝聚胺(Polybrene)是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物，具有中和肝素作用：又称肝素灵，溶解后产

3、生许多正电荷，能中和红细胞表面唾液酸所带的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，诱发红细胞产生可逆的非特异性凝聚。在此过程中，若有IgG分子已直接与红细胞搭桥，当非特异性的红细胞凝聚消散后，只有由抗原抗体引起的搭桥的特异性凝集仍存在。反应分三个步骤：1.1．红细胞致敏阶段：红细胞在低离子培育基中与相应抗体致敏。1.2．凝聚阶段：聚凝胺使红细胞非特异性地紧密接近，诱发凝聚现象，因而允许抗体与相应抗原形成桥连。1.3．再悬阶段：再悬液具有中和聚凝胺的作用，使聚凝胺诱发的非特异性凝聚散开，留下抗原抗体反应所

4、致的特异性凝集不能散开，凝集的强度与抗体的浓度、抗原的浓度及反应的导热特性有关。2、操作步骤：2.1、在盐水法通过的基础上，在主、次管均加入低离子介质4滴，混合后置于室温1分钟。2.2、在主、次管均加入聚凝胺溶液2滴，混合后，室温15秒。2.3、3500转/分，离心10秒，彻底弃上清液。2.4、轻摇试管，判断有无凝集。若无凝集，则应重复该试验（或polybrene失效）。2.5、再加入再悬液2滴，轻摇试管，观察凝集并判读结果。2.6、若凝集消散，无凝集，表明配血结果相合，反之则配血结果不合，需进一步

5、检查。3、应注意的几个问题：3.1.加试剂等要按照顺序，不能先加聚凝胺，不能有水解蛋白酶污染，否则要抑制细胞与聚凝胺的反应。3.2．本法一般最敏感的是检定IgG抗体，测定抗K，要用MPA(聚凝胺抗球蛋白试验)法，效果与低离子强度溶液抗人球蛋白试验一样。3.3．凝聚胺试验的主要缺点是在Kell系统缺乏足够的敏感性。必要时用抗人球蛋白法配血以提高Kell系统抗体的敏感性。