小鼠糖耐量测定.doc

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1、糖耐量测定在第8次免疫后即10.3号,测定给药组和对照组小鼠的葡萄糖耐量情况。每组取6只小鼠,每只小鼠的血糖值在本组平均血糖值附近。小鼠禁食不禁水16h后,每只小鼠腹腔注射剂量为2g/Kg的葡萄糖溶液。葡萄糖溶液的浓度为400mg/mL,体重20g的小鼠注射剂量为0.1mL。注射葡萄糖后0min,15min,30min,60min,120min采用尾静脉取血的方式测定小鼠的血糖值。并在注射完葡萄糖后15min时取血,测定血清胰岛素水平。血清胰岛素水平检测血清胰岛素水平的测定采用ELISA方法。样本为糖耐量实验中腹腔注射葡萄

2、糖15min时的各组小鼠血清。具体的实验步骤按照试剂盒说明书进行,大致的操作流程如下:1、每孔加入50μL标准品,或者5倍稀释的血清。2、每孔加入100μL酶标二抗,保鲜膜缠绕后37℃孵育60min。3、Washsolution满孔洗板4次。4、每孔加入50μL底物A和50μL底物B,轻轻混匀,37℃避光孵育15min。5、每孔加入50μL终止液(2mol/LH2SO4)(颜色由蓝变黄)6、15min内在450nm波长处测定OD值。7、通过标准曲线计算样品insulin水平。

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