凝胶成像及QuantityOne中文操作说明.doc

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1、.第一章简介凝胶电泳是每个做分子生物学的研究者天天都要打交道的基本技术。电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。目前有大量软件可以用于分析电泳结果，要向大家介绍的是Bio-Rad公司的1D凝胶分析软件QuantityOne（Bio-Rad还有一个做2D凝胶分析的软件PDQuest）。QuantityOne软件是常用1D凝胶分析软件中功能最强大，自动化程度最高的软件。这个软件的最新版本可以在Bio-Rad的网（.bio-rad.）免费下载，以供试用或用户升级之用。QuantityOne软件的主要功能包括定量分析(Vol

2、umesQuickGuide)，电泳条带分析(BandAnalysis)，差显分析(DifferentialDisplayAnalysis)，克隆计数(ColonyCountingAnalysis)等，此外，还可以直接控制Bio-Rad公司的各类图像仪和ExQuest自动切胶仪，使您的凝胶分析工作变得极为轻松。QuantityOne软件拥有与windows操作系统下绝大多数应用软件相同的友好界面。插入密码狗，打开QuantityOne软件，可以看到最上缘蓝色横条幅是标题栏，往下依次是菜单栏和工具栏。File图像打开

3、、保存、引入、打印等操作Match分子量估算、条带匹配分析Edit图像普通编辑操作Volumn定量分析View图像缩放、三维视图、看光密度值等操作Analysis浓度估算、克隆计数等分析Image图像旋转、翻转、裁切等操作Reports分析结果输出Lane泳道分析Window窗口分析..Band条带分析Help帮助、快捷菜单、软件注册等         每个菜单的主要功能如下：往下一行是工具栏，上面每个按钮的功能见下表：QuantityOne软件HelpàQuickGuide快捷指南提示如何实现一个功能，如定量分析

4、(VolumesQuickGuide)，电泳条带分析(BandAnalysis)，差显分析(DifferentialDisplayAnalysis)，克隆计数(ColonyCountingAnalysis)等。快捷指南下有1，2，3…步骤，根据提示完成。使用QuantityOne软件进行电泳结果分析，通常包括图像获取、图像预处理、分析、结果输出四部分。图像获取就是通过软件控制扫描仪（GS-800、PharosFX等）或凝胶成像系统（GelDoc、ChemiDoc、VersaDoc等），图像预处理就是将扫描或拍照获得

5、的原始图像进行初步处理，以便更好地进行后续分析。接下来是分析过程，根据分析的方法和目的不同，又可以分为定量分析、条带分析、克隆计数、差异（聚类）分析等等。不管如何分析，最终我们都必须通过软件的输出功能，得到我们想要的结果。QuantityOne软件提供了多种结果输出方式。在接下来的几章里，我们将按照这个思路，一步步引导您使用这一软件。..第二章图像获取QuantityOne4.4－4.6版本可以控制Bio-Rad目前几乎所有的图像仪，如GelDocXR、ChemiDocXRS等。这些图像仪采集到的图像，可以直接保存

6、成软件可直接分析的图像，即扩展名1sc的原始图像文件。下面将具体介绍如何通过QuantityOne软件从GelDocXR获取图像。GelDocXR是Bio-Rad凝胶成像系统中最常用，操作最简便的仪器，它可以用来拍摄EB、SYBRGreen等染料染的核酸电泳凝胶；SyproRuby、银染、考马斯亮蓝等方法染的蛋白电泳凝胶；以及化学显色的印记膜等。使用GelDocXR之前，先接通电源，打开位于仪器背面右下角的电源开关；然后根据具体的应用选择合适的照明和滤光片位置。原则如下：表格形式模式1.如果样品是通过EB、SYBR

7、Green、SyproRuby等染料通过紫外激发来显色，就先将样品置于紫外透射平台(UVTransilluminator)的中间，关上暗箱门，然后按下面板上的“TransUV”按钮，并将滤光片选择杆置于位置“I”处。模式2.如果样品是通过金属银、考马斯亮蓝等染料染色，就先将白光转换屏(WhiteLightConversionScreen)取下，打开下部的开关，放在紫外透射平台上，样品置于白光转换屏中间。关上暗箱门，然后按下面板上的“TransWhite”按钮，并将滤光片选择杆置于位置“I”处。模式3.如果是化学显色

8、等非透明可见样品，则用模式2中所示方法，将样品置于白光转换屏中间。关上暗箱门，然后按下面板上的“EpiWhite按钮”，并将滤光片选择杆置于位置“O”处。 接下来打开QuantityOne软件，选择File》GelDocXR，按以下顺序操作：..① 按下Live/Focus，成像仪进入实时成像；②选择照明模式，一般核酸胶用UV,蛋白胶用White模式；注意，