（考纲全景透析）2014届高考生物 专题5 DNA和蛋白质技术基础复习 新人教版选修1.doc

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1、专题5DNA和蛋白质技术【高考新动向】1、蛋白质的提取和分离2、PCR技术的基本操作和应用【考纲全景透析】一、DNA的粗提取与鉴定1、实验原理：(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。(2)DNA不溶于酒精溶液。(3)DNA不被蛋白酶所水解。(4)DNA在沸水浴条件下可被二苯胺染成蓝色。2．DNA与蛋白质在不同NaCl溶液中溶解度不同3.DNA的析出与鉴定(1)析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液等体积的冷却酒精溶液(体积分数为95%)静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物(此即粗提

2、取的DNA)，用玻璃棒沿一个方向搅拌卷起丝状物。(2)鉴定4二、多聚酶链式反应扩增DNA片段1、PCR：多聚酶链式反应的简称，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。原理：DNA的热变性2、PCR反应过程（1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链（2）复性：温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合（3）延伸：温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸（A,T,C,G）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。3、PCR结果：DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这

3、段固定长度的序列呈指数扩增。三、血红蛋白的提取和分离实验1、方法及原理方法原理凝胶色谱法根据相对分子质量的大小分离蛋白质电泳法各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白质2、操作程序：（1）样品处理：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液（2）粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。（3）纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。（4）纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。3、细胞内DNA复制与PCR技术的比较细胞内DNA复制PCR不同点解旋在解旋酶

4、作用下边解旋边复制80℃~100℃高温解旋，双链分开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA4温度体内温和条件高温相同点（1）需提供DNA复制的模板（2）四中脱氧核苷酸作原料（3）子链延伸的方向都是从5ˊ端到3ˊ端（4）都需要酶的催化【热点难点全析】一、DNA和蛋白质的技术1、比较细胞内DNA复制与DNA扩增（PCR）2.血红蛋白的提取和分离方法(1)凝胶色谱法①含义：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法。②原理a.相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。b.相对分子质量较大的蛋白质

5、无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。(2)电泳法①含义：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。②原理：利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异和分子本身大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。(3)缓冲溶液4①组成：1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。②作用：在一定范围内抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，确保实验室条件下能准确模拟生物体内的代谢过程。4