高中生物《植物的组织培养技术》学案2 苏教版选修1.doc

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1、专题3植物的组织培养技术在《生物技术实践》模块课程标准中，植物组织培养的具体要求是“尝试植物的组织培养”。尝试是技能性目标中的模仿水平，即学生仿照教师的示范性动作完成对实验对象的操作。植物组织培养是一项操作复杂而精细，操作难度较大的实践活动，其操作流程包括：配制母液、培养基配制与灭菌、外植体选择和消毒、接种、形成愈伤组织、诱导丛芽和生根、组培苗移栽等操作环节。从操作的持续时间看，完成前四项活动需要一天，后三项活动需要1～2个月。为了确保在有限的时间内顺利地开展实验教学，需要确定学生动手操作的一些重要环节和步骤，并针对这些环节和步骤提前做好实

2、验准备。1实验室的准备工作本实验需要作好三项实验准备：一是提前配制各种母液；二是提前准备MS培养基；三是选择外植体并进行预处理。1.1配制母液母液中含有大量元素、微量元素、激素（植物生物调节剂）和维生素等有机成分，母液浓度是实际溶液浓度的5～10倍。配制母液花费时间多，需要用到溶量瓶、移液管等精密仪器，无法由每位学生亲自操作，教师可带领部分学生在课外进行。母液的类型和配制顺序如下： 配制母液的注意事项：⑴自来水或河水中含有大量的矿质元素，勿用配制母液；⑵配制大量元素和微量元素母液时，应将每种化合物单独溶解后，再一一混合，同时还应用适量的蒸馏

3、水清洗烧杯内壁，并将清洗后的蒸馏水倒入混合溶液中，这样可以保证每种元素的浓度，混合时要按照教材附表中的顺序进行，最后加入的是氯化钙溶液，这样可以避免发生沉淀；⑶配制好的母液要先倒入1000ml烧杯中，再由烧杯转入1000ml细口瓶中，不可由容量瓶直接倒入细口瓶中；⑷注意观察母液中是否有絮状物，出现絮状物表明离子之间发生反应，需要重新配制母液；⑸植物生长调节剂难溶于水，需要碱或酸助溶，一般生长素类物质用碱（0.1mol/LNaOH1～3ml）或酒精（75～95％的酒精1～3ml）助溶，细胞分裂素类物质一般用酸（0.1mol/LHCL1～3ml

4、）助溶，加入蒸馏水定溶时要缓慢，也可用水浴法助溶；⑹用棕色细口瓶盛装有机物母液和植物生长调节剂母液，避免透射光损害母液中的有机成分；⑺在瓶壁上贴好各种母液的标签（下图所示）；⑻将配制好的母液放入冰箱中或阴凉处保存。  MS是穆拉希吉（Murashige）和斯库克（Skoog）两位科学家第一个字母的缩写，他们于1962年为培养烟草而设计了一种培养基，这就是组培使用中最为广泛的MS培养基；标签中间一行的数字及单位表示的意义如下，例如，100ml/L，即配制1升培养基只需从母液中提取100ml即可；50mg/100ml，表明100ml母液中含有5

5、0mg萘乙酸，如取4mg的萘乙酸，只需提取8ml母液。4除母液需提前配制好外，消毒液也需要提前配制好。外植体消毒一般采用75％的酒精、2～10％的次氯酸钠溶液等。 1.2培养基的配制与灭菌培养基的类型有很多种，通常采用MS培养基。配制培养基的流程如下：        上述的培养基配制流程中，加入各种母液的时间是在琼脂溶化之后，这样既可避免加热使母液中的各种离子发生反应，又可避免有机物母液和植物生长调节剂因高温受到损害。将母液加入培养基的顺序是：先提取大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，后提取植物生长调节剂母液，切勿先提取植物生长调节剂母液

6、，这是因为该溶液中含有酸或碱，容易与其他元素形成沉淀而失败。 培养基通常采用高压蒸汽灭菌，灭菌时间一般为15～20min，灭好菌的培养基不易保存过长时间，通常是现用现配。在对培养基灭菌的同时，也要对解剖刀、镊子、烧杯、锥形瓶、牛皮纸等必要的仪器设备进行灭菌。 1.3外植体的选择和预处理根据植物细胞的全能性原理，选择任何活的植物体都能培养出组培苗，但不同植物的各种组织和器官的分裂能力不同，同时还要考虑消毒处理的特殊情况，因此，选择恰当的外植体进行接种既有利于消毒，避免污染，又有利于在较短时间内形成组培苗，从而提高组培成功率。下面是选择外植体时

7、需要考虑的一些因素及说明。  考虑的因素  说  明外植体的年龄一般情况外植体的年龄越小，分化的程度越小，组培的成功率就越高，因此，尽量选择幼嫩的植物组织或器官作为外植体外植体的大小外植体很小和很大都不合适，很小的外植体极容易死亡，很大的外植体不容易消毒，因此，要选择大小适中的外植体。例如，如果用菊花的芽进行组培，选取的芽可为3mm左右外植体所在的部位一般选择植物的芽尖、根尖或幼嫩的茎作为外植体，这些部位的组织分裂能力强，容易形成愈伤组织外植体的外观形态由于外植体的消毒工作非常重要，因此，要选择哪些表面相对光滑容易消毒的外植体较好 选择好外

8、植体后教师还要做一些预处理，以便学生进一步消毒时能有效地杀死外植体表面的微生物。预处理包括：用清水冲洗；用洗涤灵或洗衣粉清洗；芽作为外植体时要4放在锥形瓶中加清水反复振荡，如果芽