蛋白超滤操作规程.doc

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1、蛋白超滤操作规程1.选取适当规格的超滤管（orencia和Her1-ECD-his用10KD的超滤管，IL17A-his用3KD的超滤管），先将之前保存在超滤管中的PBS倒掉，加入一些新的PBS，7500g离心5min，洗一下超滤管。2.倒掉超滤管中的PBS，加入要超滤浓缩的样品，7500g离心至截留部分剩余200-300ul液体（orencia用时8min，Her1-ECD-his8min，IL17A-his16min）。为了避免流下去的液体中可能含有蛋白而导致浪费，先将流下去的液体收集到一个管中。3

2、.向上层截留住的液体中加入4mlPBS,混匀后7500g离心至截留部分剩余200-300ul液体。4.重复第3个步骤三次，取出最后一次截留住的200-300ul液体，以PBS作空白，测浓度即可。超滤管中的废液倒掉，加入PBS保存在4℃即可。5.6.7.