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时间:2020-06-13
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1、食品微生物检验技术微生物的分离、纯化与接种技术接种工具和方法在实验室或工厂实践中,用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同,接种针的针尖部常做成不同的形状,有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时,需要用到涂布棒。接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀微生物的分离、纯化与接种技术划线接种:这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动,就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环,接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。划线接种,分离纯化I
2、noculatinganagarplatetoobtainsinglecolonies灼烧微生物的分离、纯化与接种技术斜面接种技术微生物的分离、纯化与接种技术--细菌的涂布分离技术微生物的分离、纯化与接种技术--液体接种法、穿刺接种液体接种法:包括从斜面菌种接入培养液,或从液体菌种接入液体培养液,两种情况都可以用接种环接种。但在培养量比较大的情况下,液体接种宜采用移液管接种,同时要求无菌操作。微生物的培养--微生物培养中的氧气条件培养设备:包括接种室、恒温培养室、恒温培养箱、液体发酵——摇床、厌氧培养罐等。好氧培养:例如平板培养、斜面培养、浅层液体培养、液体振荡培养或通气搅拌培养等都
3、属于好氧培养的方法。厌氧培养:除了最简便的深层液体培养以外,可以采用物理、化学或生物学的方法来排除培养容器中的空气或空气中的氧气,创造厌氧条件。对于严格厌氧的微生物,要用化学和物理并用的方法。在进行厌氧培养时,可以用指示剂检查系统中的还原条件,一般实验室中常用的如葡萄糖——美兰指示剂。微生物的培养--微生物培养中的厌氧条件生物学方法:利用植物呼吸作用,造成厌氧条件,常用的方法是在密封的干燥器底部放入发芽种子,因种子的呼吸作用增强,吸收氧气,创造厌氧条件。此法简易,但厌氧程度低。化学方法:利用焦性没食子酸吸收容器中的氧气。在容器的一边放一包用吸水紙包好的焦性没食子酸,在另一边放入碱液,
4、容器密封后,让碱液流向焦性没食子酸一边,两者反应时吸收容器中的氧气,创造厌氧条件。物理方法:常用真空泵抽出密封干燥器内的空气或再充入其它惰性气体,以保证厌氧条件。抽气前,容器内放入指示剂和培养物。一般为达到严格厌氧目的,常采用物理和化学相结合并用的方法。微生物的培养--微生物培养中的厌氧培养美兰氧化还原指示剂:0.006NNaOH0.015%美兰溶液6%葡萄糖溶液上列三种溶液在使用时等量混合,加热使美兰退色,迅速放入厌氧罐中。细菌生理学检查法--微生物保藏方法斜面冰箱保藏法:将菌种接在新鲜斜面培养基上,定温培养长出丰满菌苔后,一般形成芽孢的细菌要形成芽孢,形成孢子的微生物要长出孢子,
5、贴上标签,放在试管架上,在棉塞部位用尼龙紙或防水紙包好,放入40C冰箱中保藏。一般每隔3个月至半年用新鲜培养基移植1次。方法简便,实验室均采用。缺点:移接代数太多,易产生变异、退化。石蜡封藏法:在已长好的斜面菌种上加入无菌液体石蜡油,高出斜面1cm直立试管放入冰箱保藏,适用保存细菌和放线菌。石蜡的处理:250mL三角瓶装100mL液体石蜡,1.05kg/cm3高压灭菌30min,然后放在1050C左右的烘箱中1h,使水分蒸发掉。砂土管保藏法:(可用于保藏产孢子的放线菌、霉菌和产芽孢的细菌)。1.砂土管的制备:取河沙若干,用40目过筛,出去大颗粒,加10%HCl后煮沸30min,除去有
6、机质(也可用10%HCl浸泡2—4h)。最后倒去酸水,用自来水冲洗至中性,烘干备用。另取0.3m以下非耕作层的瘦黄土若干,晒干磨细,过120目筛。2.按土:砂=1:4的比例均匀混合,装入指形管中,以1cm高为宜,塞上棉塞,160~1700C干热灭菌2h。3.在新鲜菌种斜面上加入3mL左右的无菌水,用无菌接种环制成菌悬液,用无菌吸管吸取0.2~0.3mL的菌悬液放入每个砂土管中,用接种环拌匀,并贴上标签,注明菌名。4.菌液加好后,立即进行抽真空干燥,要求在24h内抽干,尤其是夏天要求较短时间内抽干。摇散砂土,放干燥器内冰箱保藏。冷冻真空干燥保藏法:此法一般常用于细菌或病毒一类的菌种保藏
7、,常用脱脂牛奶或血清作为菌种的保护剂。细菌生理学检查法--微生物生化反应生化反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。糖酵解试验淀粉水解试验V-P试验甲基红(MethylRed)试验靛基质(Imdole)试验枸椽酸盐试验:尿素酶(Urease)试验三糖铁(TSI)琼脂试验细菌生理学检查法--糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。细菌生
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