动物的克隆(浙科版).ppt

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1、第三节动物的克隆1、动物细胞全能性的特点？随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。2、离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆？不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。动物细胞的培养和克隆形成机械消化或者胰酶消化一、动物细胞、组织培养1、什么方法取得离体的单个动物细胞？2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动？能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。3

2、、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现出生命活动？1、幼嫩细胞（如：动物胚胎或幼龄动物组织、器官）2、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。（胰蛋白酶）动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一样呈现一定的组织特性。动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最终成为细胞培养。动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的结构、功能及分化能力。组织培养7.1951年，海拉细胞系的建成。6.1950年，人工培养液“199”研制成功1.1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活

3、。2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月，且观察到细胞分裂。3.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养，成功看到神经末端的阿米巴运动。4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养和传代培养。5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞克隆。“组织培养”一词产生真正的组织培养开始；创立了悬浮培养法成功进行了传代培养；发明了卡氏瓶；标志着组织培养工作进入全新阶段二、动物组织培养技术的发展2、适宜的环境条件无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5℃pH值：7.2-7.4适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2

4、）适宜的渗透压等（一）培养条件三、动物细胞培养过程成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等1、含全部营养物质的培养液（二）培养过程从动物胚胎或幼龄动物组织切片中取小片样品转入特殊培养液原代培养分装到多个卡氏瓶中传代培养单个细胞悬浮液CO2培养箱中保温培养细胞系机械消化或胰酶消化（胰蛋白酶）（二）培养过程动物组织细胞间隙中含有一定量的胶原纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。原代培养物选择或纯化选择或纯化细胞株细胞株二氧化碳培养箱通过在培养箱内模拟形成一个类似细胞或组织在生物体内的生长环境，如恒定的pH值（7.2-7.4）、稳定的温度（37°C）、较高的相对湿度

5、（95%）、稳定的CO2水平（5%），来对细胞或组织进行体外培养的一种装置。离体动物细胞的生长特性：（1）贴壁生长：悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。（2）接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂。（3）正常的生命活动：生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象，但不分化。细胞贴壁过程细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止。接触抑制如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？细胞悬浮液转入特殊培养液首次培养换瓶后培养原代培养传代培养为什么？如果不进行传代培养，就会因细胞密度过大和代谢消耗引起营养枯竭，

6、不能正常生长。原代培养传代培养…………原代培养物细胞系：可连续传代的细胞原代培养物在首次传代时就成为细胞系。能连续培养的连续细胞系不能连续培养的有限细胞系四、细胞系、细胞株（二倍体细胞）（异倍体核型细胞）（1）恶性细胞系，异体致瘤性（2）保留接触抑制，不致癌（遗传物质改变，不死性）2、细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。如：单抗细胞株细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。有限细胞株：传代次数有限的细胞株细胞系：泛指可传代的细胞。细胞株:具有特殊性质的细胞系。五、克隆培养法（细胞克隆

7、）1、概念：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。2、特点：遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究异质性细胞系克隆培养纯系（克隆）3、最基本要求:保证所建成的克隆来源于单个细胞4、适合于克隆的细胞：对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞5、提高细胞克隆形成率的措施：选择适宜的培养基添加血清（胎牛血清）(能促进细胞的生长、增殖和贴附)以滋养细胞支持生长（经