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《药学基础实验细胞与免疫学技术实验部分思考题.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、以计数酵母菌为例 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵
2、母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数 (2)25格x16格的血球计数板计算
3、公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数思考题：试验43:动物细胞的原代培养1．如何提高原代细胞培养的成功率?（就是注意事项）1．培养材料的选择，尽量选取胚胎或幼小的生物体组织或者繁殖能力较强的组织，如肿瘤组织等。2．要注意无菌操作，其要求应高于外科手术。3．整个取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡酒精时间不能过长，以保证胚胎细胞活性。4．运用消化法时胰酶温度应低于37~C，浓度只需平时消化细胞浓度的一半。因为此过程不像消化培养细胞时的1－10min，而是至少20mi
4、n，先消化下来的细胞在此胰酶消化液中可存活10min以上。如果胰酶作用过强，则这些细胞易被损伤不易生存。5．如使用组织块法，则应待组织块略干燥，能粘附于瓶壁时再使之与培养基接触，勿使组织块漂浮起来。如果组织块没有贴壁，则细胞不易生长，即使生长也因没有贴在瓶壁上而无法收集到。2．为克服微生物污染采取了哪些措施?1.器皿准备中的预防：用于细胞培养的器皿应该严格消毒，做到真正洁净；应该无菌的物品，要做到消毒严格、真正无菌2操作过程中的预防；主要包括：超净台内放置的所有培养瓶瓶口不能与风向相逆，不允许用手触及器皿
5、的无菌部分，如瓶口和瓶塞内侧；在安装吸管冒、开启或封闭瓶口操作时要经过酒精灯烧灼，并在火焰附件工作；吸取培养液、细胞悬液等液体时，应专管专用，防止污染扩大或造成培养物的交叉污染；使用培养液前，不易较早开启瓶口；开瓶后的培养瓶应保持斜位，避免直立；不再使用的培养液应立即封口；培养的细胞在处理之前不要过早的暴露空气中；实验44传代细胞的培养1细胞传代培养的目的是什么：是组织培养常规保种方法之一，可以获得大量实验所需的细胞。2如何保证在传代过程中不被微生物污染尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每
6、一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。如发现污染，一般弃置污染细胞，如必须挽救可加含有抗生素的培养基反复清洗，随后培养基中加入大量的抗生素，并经常更换培养基。实验46动物细胞的冻存与复苏1如何运用“缓慢冻存，快速复苏”的原理保存细胞冻存管在4℃冰箱中存放30分钟，转放-20℃冰箱中1.5~2h，再转入-80℃冰箱中4~12h后转移到液氮中（-196℃）保存。复苏时直接放进37℃水浴锅中。2冻存液的作用：保护细胞，可是溶液冰点降低，加之在缓慢冻结下，细胞内水分透出，减少了冰晶形式，避免细胞损伤。实验50
7、淋巴细胞转化实验1试比较淋巴细胞转化实验的优缺点╮(╯▽╰)╭我不知道2淋巴细胞转化试验有何意义？淋巴细胞转化率的高低反映机体的细胞免疫水平可作为测定机体免疫功能的指标之一。淋巴细胞转化试验不但可作为变态反应性疾病和免疫缺陷性疾病的辅助诊断，还可用于自身免疫性疾病和肿瘤病因的研究以及预后判断。一般情况下新生儿淋巴细胞转化率稍高，老年人偏低。实验51琼脂免疫扩散实验1双向免疫扩散试验主要用于哪些方面。双向免疫扩散可根据沉淀线的位置、数量、形状以及对比关系，对抗原或抗体进行定性分析，常用于抗原和抗体的纯度鉴定
8、以及抗体效价测定。该方法简便易行，结果稳定可靠，临床曾用于诊断和分析某些疾病，如检测AFP、HBsAg等。但敏感度较低，试验所需时间较长，只能定性，不能定量，仅适用于大量普查项目。2为什么抗原、抗体要选择适当比例？抗原抗体反应有一个平衡,浓度不合适,影响免疫复合物的形成。在比例适当处可形成可见的沉淀线。53酶联免疫吸附试验ELISA1ELISA有哪些类型，其原理各是什么？（1）双抗体夹心法。。。原理：利用连接于固相载体上的抗体
