Beclin1和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义.pdf

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1、·1302·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9)Beclinl和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义陈恳，郝宗耀，周骏，樊松，梁朝朝摘要目的探讨Beclinl和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的膀胱尿路上皮癌患者56例，32例正常膀胱组织在膀胱尿路上皮癌中的表达及两者的相关性。方法通过作对照。56例患者中男47例，女9例；年龄43—81免疫组化法检测56例膀胱尿路上皮癌和32例正常膀胱组(63．1±8．9)岁。肿瘤临床分期按TNM标准：I期

2、织的Beclinl和LC3表达，对比表达的差异。结果膀胱尿9例，Ⅱ期23例，Ⅲ期21例，Ⅳ期3例；肿瘤生长方路上皮组织Beclinl阳性表达率为66．1％(37／56)，显著低式：乳头状15例，浸润性41例；有淋巴结转移患者于正常膀胱组织的93．8％(30／32)，差异有统计学意义(P<2例。0．01)，而癌组织中LC3阳性表达率为50％(28／56)，亦显著1．2免疫组化法分析Beclinl和LC3两种蛋白的低于正常膀胱组织87．5％(28／32)，差异有统计学意义(P<0．01)；Beclinl和LC3表

3、达均与患者临床分期有关(P<表达一抗采用Beclinl兔抗人单克隆抗体(美国0．01)，与患者年龄、性别及肿瘤生长方式不具有相关性(PSantaCruz公司)和LC3兔抗人单克隆抗体(美国>0．05)；Beclinl和LC3在膀胱尿路上皮癌中的表达具有正CeUSignalingTechnology公司)，采用sP法，操作按相关性(P<0．01)。结论膀胱尿路上皮癌中Beclinl和试剂盒说明书进行。主要包括：石蜡切片脱蜡，胰酶LC3阳性表达率低于正常膀胱组织，两者可能均与膀胱尿路抗原修复，滴加过氧化酶阻断液(

4、37qC，封闭10上皮癌的发生发展有关。min)，后用10％非免疫性动物血清(37℃，孵育40关键词Beclinl；LC3；膀胱尿路上皮癌；免疫组织化学min)，随后滴加Beclinl抗体(1：100，4oC过夜)或中图分类号R34；R737．14；R-331LC3抗体(1：100，4℃过夜)，再用生物素标记的鼠文献标志码A文章编号l000—1492(2014)09—1302—03抗兔二抗(37℃，孵育20min)，DAB显色。苏木精复染。用PBS代替一抗做阴性对照，用已知膀胱尿自噬广泛存在于正常的生理过程，

5、又是细胞对路上皮癌阳性片做阳性对照。不良环境的一种防御机制，同时还参与多种疾病的1．3结果判定Beclinl、LC3阳性表达为棕黄色颗病理过程，包括多种恶性肿瘤¨J。Beclinl和LC3均粒。Beclinl阳性见于细胞质，细胞间质及细胞核均是参与自噬体形成的重要基因，Beclinl是自噬特异不表达，而LC3阳性表达见于细胞质，强阳性时细性基因，在自噬的溶酶体降解过程中起到肿瘤抑制胞问质和细胞核中亦可见表达。每张切片采用双盲作用，而微管相关蛋白1轻链3(microtubule—associ．法随机观察5个高倍

6、视野，计数100个细胞，依据阳atedprotein1lightchain3，LC3)是自噬标志性基性细胞比率及着色深度分别评估，最后综合评定。因，是自噬特异的诊断指标之一_2J。该研究通过免阳性细胞比率评分J：0分为阴性，阳性细胞数占总疫组织化学方法检测膀胱尿路上皮癌中Beclinl和细胞数≤10％为1分，阳性细胞数占总细胞数10％LC3蛋白的表达，探讨其在膀胱尿路上皮癌中的可能作用。一50％为2分，阳性细胞数占总细胞数51％一80％为3分，阳性细胞数占总细胞数>80％为4分。染1材料与方法色深度评分：无染

7、色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。总评分为两者评分相乘，≤31．1病例资料选取安徽医科大学第一附属医院分为阴性，>3分以上为阳性。2008年1月一2012年12月行手术治疗、病理确诊1．4统计学处理使用SPSS11．5软件进行统计分析，计数资料的比较采用x检验，两变量间相关2014—05—29接收基金项目：卫生部国家临床重点专科建设项目性采用Spearman秩相关分析。作者单位：安徽医科大学第一附属医院泌尿外科，合肥2300222结果舒城县人民医院泌尿外科，舒城231300作者简介：陈恳，男，

8、硕士研究生；2．1BecHnl和LC3在膀胱组织中的表达Bec．梁朝朝，男，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，E．1inl主要表达于细胞质，少量或微量表达于细胞膜，mail：Liangchaozhao@163．corn_LC3主要表达于细胞质。Beclinl和LC3在膀胱组·1304·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9)肿瘤