稀土离子络合物荧光探针测量胆红素及其荧光猝灭机理研究.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第10期2010年10月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1501～15O4DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01501稀土离子络合物荧光探针测量胆红素及其荧光猝灭机理研究边玮玮“张娜阎芳王守训李耀辉(潍坊医学院医用化学教研室，潍坊261053)(黄山学院化学系，黄山245041)摘要在NHAc．HAc缓冲溶液(pH6．90)中，强力霉素可以和铕离子(Eu”)生成二元络合物，能量从强力霉素转移到Eu“，发射出Eu“位于612nm处的特征荧光。加人胆红素后，强力霉素将能量转移给胆红素

2、。因此，Eu位于612nm处的特征荧光强度降低，且降低的荧光强度与加入胆红素的浓度成正比，据此建立了荧光光度法测量胆红素的方法。在最佳实验条件下，测量的线性范围为5．0×10一～3．0×10mo~L；检出限为8．4×10一mol／L。本方法操作简单，可以较好地避免共存物质的干扰，并成功用于人血清样品中胆红素含量的测定。关键词强力霉素；铕；血清；胆红素；荧光1引言胆红素(Bilirubin，BR)是人体内血红蛋白等含铁卟啉化合物分解代谢的产物和代谢中间体，具有体内和体外的抗氧化功能。正常人血清中总胆红素不超过2．0×10。。mol／L，超过此值，胆红素将沉积在皮肤、巩膜、粘膜等组织上，引

3、起黄疸病。而胆红素浓度过低是诱发冠心病的重要因素。因此，胆红素的含量是临床诊断的重要参数，具有很高的生理学和临床价值¨。目前，测定胆红素的方法是利用Diazo反应Jendrassik—Grof光度法(J—G法)和胆红素氧化酶法。另外还有利用高效液相色谱法[4]、毛细管胶柬电动色谱法]、光纤传感法[6和流动注射法8。。等测量胆红素的报道。强力霉素(DC)是含有．二酮结构的抗菌素药物，是铕离子(Eu¨)的理想配体。至今，已有利用稀土离子Eu¨的二元配合物作为荧光探针检测磷脂、肝素¨引、过氧化氢酶活性的报道。上述方法都具有荧光量子产率高、Stokes位移大、发射峰窄、荧光寿命长等优点，避免了

4、生物大分子对荧光发射峰的背景干扰H]。本实验选择强力霉素作为Eu¨的配体，所形成的二元络合物能够发射出Eu¨位于612nm的特征荧光。实验表明，加入胆红素能够显著降低Eu¨位于612nm处的特征峰，并且荧光强度的降低值与加入的胆红素的浓度成正比，据此建立了测量人血清中胆红素的荧光分析方法。本方法可以在室温下操作。应用本方法测量人血清实际样品中胆红素含量，并讨论了体系荧光猝灭的机理。2实验部分2．1仪器与试剂RF-540型荧光分光光度计、uV-265型紫外一可见分光光度计(日本岛津公司)；PHS一3B型酸度计(上海雷磁仪器厂)。胆红素(BR，上海卫辉化学试剂厂)储备液：准确称取适量BR，

5、以石英亚沸蒸馏水溶解，使用前以石英亚沸蒸馏水稀释得工作液(1．0×10mol／L)；强力霉素(DC，中国药品生物制品检定所)储备液：准确称取0．1918g强力霉素，以石英亚沸蒸馏水溶解并定容至500mL，得6．0×10mol／L的储备液，使用时以石英亚沸蒸馏水稀释得工作液(6．0×10-4mol／L)；Eu储备液：准确称取适量EuO(99．99％，上海跃龙有色金属有限公司)，加入少量浓HC1，加热使其溶解，并挥发至近干，然后用0．1molfLHC1稀2010-02—10收稿；2010-05-20接受本文系国家自然科学基金(No．30572323)和潍坊医学院科研资金(No．KQ2007

6、030)资助项目$E—mail：bian0303@163．COlll1502分析化学第38卷释至100mL，作为储备液，使用时以石英亚沸蒸馏水逐级稀释至5．0×10～mol／L；0．10mol／LNHAc．HAc(pH6．90)缓冲溶液。以上储备液与工作液均需置于0～4℃的生化培养箱内保存。2．2实验方法2．2．1绘制标准曲线在10mL比色管中依次加入2．0mL0．10mol／LNHAc—HAc缓冲液(pH6．90)、1．0mL5．0×10mol／LEu“溶液、0．5mL6．0×10mol／LDC溶液和2．0mL1．0×10mol／LBR溶液，以石英亚沸蒸馏水定容至刻度，在室温放置20

7、min后测量吸收光谱和荧光光谱。在A／A=385／612nm处，测定其荧光强度F，同时测定其试剂空白(缓冲液．Dc．Eu¨)的荧光强度，加入BR后使Eu¨．DC体系荧光强度的减小值表示为△F=F0一F。利用标准曲线法进行人血清中痕量胆红素的含量测定。2．2．2人血清样品的处理方法按文献[3]对血清进行预处理：取血清1．0mL，加入乙腈2mL，搅拌，以4000r／min离心20min，取上层清液至分液漏斗中，加入氯仿4mL，用HC1调至pH1～2