应用qPCR方法检测中国近海塔玛亚历山大藻复合种的研究.pdf

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1、第33卷第8期环境科学学报Vo1．33．No．82013年8月ActaScientiaeCircumstantiaeAug．，2013高岩，于仁成，张清春，应等．2013的．应用qPCR方法检测中国近海塔玛亚历山大藻复合种的研究[J]．环境科学学报，33(8)：2256-2263GaoY，YuRC，ZhangQc，eta1．2013．ApplicationofqPCRmethodindetectionofAlexandriumtamarensespeciescomplexinChina[J]．Acta用研S

2、cientiaeCircumstantiae，33(8)：2256—2263qPCR方法检测中国近海塔玛亚历山大藻复合种究高岩，于仁成，张清春，周名江1．中国科学院海洋研究所海洋生态与环境科学重点实验室，青岛2660712．中国科学院大学，北京100049收稿日期：2012．11—30修回日期：2013．03．13录用日期：2013．03．13摘要：亚历山大藻属的部分藻种(Alexandriumspp．)能够产生麻痹性贝毒毒素(PST)，是重要的有害藻华(HAB)原因种．由于亚历山大藻属中的有毒和无毒藻种形

3、态相似，且海水中亚历山大藻的细胞密度通常很低，因此，高灵敏度、高特异性的分子生物学方法在亚历山大藻检测方面具有重要的应用前景．塔玛亚历山大藻和链状亚历山大藻是中国近海主要的有毒亚历山大藻藻种，大多属于塔玛亚历山大藻复合种第四类核糖体型(Group1V，以往称为“亚洲温带核糖体型”)．因此，本研究尝试将实时荧光定量PCR(qPCR)方法用于我国近海塔玛亚历山大藻复合种(GroupIV)的快速检测，并对方法的特异性和灵敏度进行了检验．研究表明，所建立的qPCR方法能够特异性地检测我国近海不同海域分离的塔玛亚历山

4、大藻复合种(GroupIV)，方法具有良好的线性响应关系和较高的灵敏度，最低可检出5个藻细胞，具有良好的应用前景．然而，实验也发现，自我国近海分离的塔玛亚历山大藻复合种的不同藻株之间，以及处于不同生长阶段的藻细胞之间，qPCR检测结果存在显著差异，反映了目标藻核糖体RNA基因拷贝数的差异和变化对qPCR检测结果的影响．因此，建议在将qPCR方法用于不同海域亚历山大藻样品检测时，应采用该海域分离的藻株专门构建标准工作曲线，以减小定量分析误差．关键词：亚历山大藻；有害藻华；实时荧光定量PCR文章编号：0253—

5、2468(2013)08-2256-08中图分类号：X835，X171．5文献标识码：AApplicationofqPCRmethodindetectionofAlexandriumtamarensespeciescomplexinChinaGAOYan一，YURencheng’，ZHANGQingchun，ZHOUMingjiang’1．KeyLaboratoryofMarineEcologyandEnvironmentalSciences，InstituteofOceanology，ChineseAca

6、demyofSciences，Qingdao2660712．UniversityofChineseAcademyofSciences，Beijing100049Received30November2012；receivedinrevisedform13March2013：accepted13March2013Abstract：SeveralspeciesingenusAlexandriumcanproduceparalyticshellfishtoxins(PST)，andareimportantcausa

7、tivespeciesofharmfulalgalblooms．Duetothesimilarityinmorphologicalfeaturesbetweentoxicandnon-toxicspeciesandtherelativelylowcellabundanceoftoxicAlexandriumcellspresentedinwatercolumn，molecularbiologicalmethodswithhighspecificityandsensitivityhavegreatpotent

8、ialindetectingtoxicAlexandriumcells．A．tamarenseandA．catenellaarethetwomajortoxicspeciespresentedinthecoastalwatersofChina，andmostofthestrainsidentifiedsofarwereassignedtotheGroupIVribotype(previouslynamedas“T