WI-03-32检定菌传代接种方法.doc

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1、恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-32版号A.0检定菌接种传代方法页次1/2生效日期2020/01/021．目的制订检定菌接种传代方法，对从事检测的操作人员进行培训指导，按方法操作。2．适用范围:本方法适用于检定菌接种传代。3.职责检定菌管理员对本方法实施负责。4．程序检定菌传代芽孢杆菌传代周期为3～6个月，其它菌种为1个月。原则上传代数在传代培养基斜面上接种5〜8支，按使用量进行适当调整。4.1仪器冰箱、净化工作台、手提式压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、生化低温培养箱4.2器具接种环、酒精灯、试管4.3培养基、菌种：试验菌、新洁尔灭溶液（5%）、乙醇（99.5%）、营养琼脂培

2、养基等4.4操作方法4.4.1消毒液：4.4.1.10.1%新洁尔灭溶液：往10L试剂瓶里加入9.8L蒸馏水和200mL新洁尔灭溶液(5%)，搅拌均匀将已灭菌过的毛巾浸湿在这消毒液中备用。4.4.1.275%乙醇溶液：往1000ml试剂瓶里放入250ml蒸馏水和750ml乙醇溶液(99.5%)，搅拌均匀，已灭菌过的毛巾浸湿在消毒液中备用。4.4.2准备：将传代培养基准备5〜8支，保存在冰箱（1〜10℃）中的试验菌准备2支，用新洁尔灭溶液（0.1%）或乙醇(75%)擦拭菌种管、试管后，移入净化工作台，紫外灯照射30分钟以上。4.4.3接种：4.4.3.1左手持分离培养的平板培养基，右手持

3、接种环，经火焰烧灼，冷却后在平板上挑取菌落。4.4.3.2左手立即放下平板，换持斜面培养基，用右手小指和无名指拔出管塞，夹持于手指之间。4.4.3.3将管口在火焰上通过两三次，但勿烧烫。再迅速将挑取有菌的接种环伸进斜面内，从斜面的底部向上划一条接种线，又自下而上蜿蜒接种成曲线。恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-32版号A.0检定菌接种传代方法页次2/2生效日期2020/01/024.3.3.4退出接种环，塞上管塞。接种环经火焰灭菌后放置。接种的斜面培养后，沿接种线长出菌苔，非接种线的部位应无细菌生长。4.4.4贴标签：试验菌接种结束后，贴上标签。4.4.5培养：在35℃～37℃

4、培养箱内培养1天或20～25℃培养5～7天（真菌）。4.4.6保存：培养结束后，用胶袋封口，1〜10℃保存。4.4.6.1芽孢杆菌保存期为3〜6个月，其它菌种为1个月，试验菌传代次数为5次。4.4.6.2试验用菌株传代次数不超过5次，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。5．相关记录及保存5.1检定菌的管理记录；5.2由品管部保管5年。6．相关操作规程6.1．电热鼓风干燥箱操作规程6.2．HWS-12型电热恒温水浴锅操作规程6.3．生化培养箱操作规程6.4．YX手提式压力蒸汽消毒器操作规程6.5．净化工作台操作规程编制：日期：审批：日期：批准：日期：