天然产物分离技术

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1、天然产物分离技术前言重要性天然药物的开发（WTO，知识产权）提取基础分离提取1文献化学成分种类2系统预试3提取溶剂a水（鞣质、糖类、蛋白质）HClNaOH成盐溶出冷水、热水b醇（乙醇、甲醇）95%--alkaloids60-70%--皂苷、黄酮苷40-50%--强心苷c丙酮、乙酸乙酯、苯等（苷元）4提取方法a冷浸法（3-4次）优缺点b渗漉法（10倍量）受热易分解物溶剂梯度c煎煮法（3-4次）水或稀醇分离1分类a粗分（部位分离）b细分（部位分组分离）c单离（单体成分分离）2方法层析（平面层析、柱层析、逆流层析）SFE结晶平面层析TLC定性：预试对照——标准品种类：硅

2、胶G,GF254显色：广泛——碘、H2SO4—EtOH专属——alkaloids,flavonoids等PTLC（PreparativeTLC）制备量g级1吸附剂（adsorbents）材料：Silicagel尺寸：20*2020*40厚度：0.5-2mm2样品带手工自动点样器样品带宽的解决方法a用极性流动相展开约2cm，使带变窄b用带浓缩带的板子3流动相选择三角性法则4样品的收集洗脱显色：定位转移洗脱5PTLC制备样品时引入的杂质粘合剂杂质指示剂Other(分解物)(Al2O3作吸附剂)难点解决办法：SephedexLH-206技术发展aHPTLCb巨形板TLC

3、不锈钢板(60*60)厚度5mm上样量＞10gc带浓缩带TLCd展开方式多次展开（同方向）双向展开e移植TLCOPLC（OverpressureLayerChromatography）又称OverpressureTLC(OPTLC)1简介1979年Tyihak综合TLC,HPTLC优点，吸收HPLC的某些特点。平面细颗粒蒸汽相恒流速2装置3特点a与传统PTLC比较b效率50mg~0.5g1hc优点4制备型OPLC联机检测分段收集5应用氨基酸，多肽，胡萝卜素，生物碱等离心薄层层析（CTLC）centrifugalTLC,Chromatotron1概述CTLC是在TL

4、C和柱色谱基础上发展起来利用旋转离心力，连续洗脱2仪器倾斜盘流动相中央进入梯度、UV检测、N2保护固定相活化反复使用3特点优点：（1）快速<30min（2）流动相少（3）可反复使用（4）进样方便（5）直接洗脱（6）直接检测，接收灵活（7）可梯度洗脱（8）占地小，移动方便（9）分离杂质少3特点缺点：（1）固定相限制（2）Rf值（3）显色（4）收集污染（5）上样量少4应用生物碱、人参皂苷5注意事项柱层析ColumnChromatogrphy常压柱层析(0.1~50g)（OrdinaryColumnChromatogr.）吸附性柱色谱分配性柱色谱植物有效柱色谱离子交换柱

5、色谱成分分离凝胶过滤柱色谱主要手段聚酰胺柱色谱大孔吸附树脂一、吸附性柱层析Al2O3orSilicagel生物碱水溶性Al2O3甾体脂溶性Silicagel挥发油脂溶性1装柱Al2O3：吸附剂:样品(20~50:1)(20~100:1)Silica：吸附剂:样品(30~100:1)(300~400:1)1)干法与TLC吻合度较好，溶剂消耗少2)湿法紧密，前沿整齐2上样1)湿法溶剂溶解上样（少量），低极性2)干法低极性溶剂溶解性差3洗脱常压低压梯度洗脱4收集与检查等份TLCUV二、聚酰胺（Polyamide）1原理a氢键吸附原理酰胺键酚类、酸类、醌类、硝基化合物成氢

6、键能力与溶剂有关水<甲醇<乙醇<丙酮<稀氨液<稀NaOH氢键吸附规律：基团多少；基团位置；芳香核，共轭双键；分子内氢键b极性吸附原理非极性脂肪链萜类、甾体、生物碱黄酮苷与苷元非水（正相）含水（反相）2聚酰胺粉的制备国产（15~30目）层析用（80~100目）粗粉蒸馏水浸泡过夜，磨细，混悬液直接使用抽滤后，60~80度烘干2~3小时备用3操作a装柱细粉水浸泡装柱，自然沉降b上样20~30%水溶液上样40-60:1c洗脱水含水醇95%醇3%NaOH5%NaOH4再生5%NaOH三、分配性柱层析1原理利用混合物在两相互不混溶中分配系数不同，而达到分离的一种柱层析方法。分

7、配系数差异愈大，分离效果愈好。2支持剂硅胶、硅藻土、纤维粉3溶剂系统的选择PC层析选择4操作a装柱b上样c洗脱四、凝胶柱层析（SephadexLH-20）1葡聚糖凝胶简介由葡聚糖凝胶SephadexG-25交联亲脂性羟丙基而制备，是同时具备吸附层析、分配色谱和分子筛功能的独特层析介质，溶剂系统没有限制，包括水相缓冲液、丙酮、乙酸乙脂、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯和各种混合溶剂，大量文献证明它非常适合于天然产物纯化，特别是中草药有效成分如甙类、生物碱、黄酮、蒽醌、内酯、帖类、甾类、多酚的分离。德国科学家HansHenke著有SephadexLH-20凝胶色谱分离专

8、著，详尽叙