实验一 酶的底物专一性.doc

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1、实验一酶的底物专一性一、实验目的了解酶的专一性，掌握检查酶的专一性的原理和方法，学会排除干扰因素，设计酶学实验二、实验原理（1）酶的专一性。酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。按照酶的专一性程度分为：键专一性（只要求作用于一定类型的键，对键两端的基团无严格的要求，如脂酶，核酶）。基团专一性(又叫族专一性，只对键两端的其中一个基团要求严格，如α-、β-葡萄糖苷酶，转移酶)。绝对专一性（只作用于一种底物，如某些核酸工具酶）。立体异构专一性（旋光异构专一性和几何异构专一性）。（2）淀粉和蔗糖

2、的结构淀粉有2种：直链淀粉和支链淀粉。直链淀粉是由200～300个α-葡萄糖以α-1,4糖苷键相连成一直链，支链淀粉不仅有α-1,4糖苷键，还有α-1,6糖苷键，从而在直链淀粉的基础上形成分支。蔗糖是双糖，由α-葡萄糖和β-果糖以α-1,2糖苷键相连而成。（3）Benedict反应Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，以颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。本实验分别以唾液淀粉酶（内含淀

3、粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性三、试剂（1）干酵母、可溶性淀粉或食用淀粉、蔗糖、NaCL、柠檬酸钠、无水碳酸钠、硫酸铜。（2）新鲜淀粉酶溶液：唾液1ml倒入10ml量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到70ml，静置10分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀。（3）蔗糖酶溶液：干酵母2.5g置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约4ml），用力研磨10分钟，转移到50ml离心管中，另用25ml蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5分钟，4000r/min离心5分钟，小心取出上清液（含蔗糖酶）备用。（4）0.5%淀粉

4、溶液（含0.3%NaCL）：可溶性淀粉或食用淀粉新鲜配置。先清水浸泡，离心，沉淀如是清洗三次再配置。（5）2%蔗糖溶液：蔗糖要分析纯。（6）Benedict试剂：85g柠檬酸钠(Na3C6H3O7·11H2O)加50g无水碳酸钠，溶于400ml水；8.5g硫酸铜溶于50ml热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液，边加边摇，最后定容至500mL，如有沉淀可过滤。本试剂可长期使用，放置过久出现沉淀时可用上清液。（7）器材：试管架，试管10只，烧杯（100mL*2，200mL*1），量筒（10mlx1，100mlx1），玻璃漏斗，棉花，研钵，石英沙，500ml容量瓶，四、

5、操作方法1、检查试剂取3支试管，按下表操作试管1试管2试管30.5%淀粉溶液/ml32%蔗糖溶液/ml3蒸馏水/ml3Benedict试剂/ml222摇匀，沸水煮沸2分钟观察记录结果原因（2）淀粉酶的专一性试管1试管2试管3稀释的唾液淀粉酶/ml1110.5%淀粉溶液/ml32%蔗糖溶液/ml3蒸馏水/ml3摇匀，37℃保温45分钟Benedict试剂/ml222摇匀，沸水煮沸2分钟观察记录结果原因（3）蔗糖酶的专一性试管1试管2试管3蔗糖酶溶液/ml1110.5%淀粉溶液/ml32%蔗糖溶液/ml3蒸馏水/ml3摇匀，37℃保温15分钟Benedict试剂/ml222摇匀，

6、沸水煮沸2分钟观察记录结果原因思考题（1）观察酶的专一性为什么要设计这3组实验？每组各有什么意义？每组中蒸馏水分别起什么作用？（2）将酶煮沸10分钟，重做2、3的操作会有什么结果？（3）请回忆淀粉类型、结构及蔗糖的结构式。附酶的激活剂及抑制剂一、目的和要求了解酶促反应的激活与抑制。学习检定激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。二、原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。例如，氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂，硫酸铜为其抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制

7、剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，氯化钠达到1／3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活性。三、试剂（1）1％淀粉溶液（2）稀释100～200倍的新鲜唾液（3）1％氯化钠溶液（4）0.1％硫酸铜溶液（5）碘化钾—碘溶液：将碘化钾20g及碘10g溶于100ml水中，使用前需稀释10倍。四、操作方法试管1试管2试管31%氯化钠溶液/ml10.1%硫酸铜溶液/ml1蒸馏水/ml10.1%淀粉溶液/ml333稀释唾液/ml111摇匀，37℃保温15分钟碘化钾—碘溶液2