酶联免疫试验两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素分析.pdf

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1、检验医学与临床2013年10月第lO卷第19期LabMedGlin，October2013，Vo1．10，No．19·论著·酶联免疫试验两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素分析叶炼，赵政，王芳，杨平(四川省科学城医院，四川绵阳621900)【摘要】目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的影响因素。方法分别在稀释液的量、洗板时机、孵育时间、显色时间等不同条件下对阳性混合血清、阴性混合血清和弱阳性对照血清进行检测。结果使用滴瓶滴加1滴稀释液、不加入稀释液、加入血清后温育时间缩短为45min、加入酶结合物后孵育时间缩

2、短为15min、加入显色剂后显色时间缩短为l5rain，弱阳性结果较标准方法差异有统计学意义；加入样本孵育1h后洗板，阳性、弱阳性和阴性结果均较标准方法差异有统计学意义。结论EIIsA条件的改变，就强阳性标本而言或许影响不大，但弱阳性标本的结果会被显著影响，尤其是处于临界值(灰区)的标本所受影响可能就更为明显。【关键词】乙型肝炎表面抗原；酶联免疫吸附试验；两步法；影响因素DOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2013．19．024文献标志码：A文章编号：l672—9455(2013)19254602Influencingfactorson

3、two-stepELISAdetectionofHBsAgYELian，ZHAOZheng，WANGFang，YANGPing(Si—chuanScienceCityHospital，Mianyang，Sichuan621900，China)[Abstract]ObjectiveTodiscusstheinfluencingfactorsontwostepenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)detectionofhepatitisBvirussurfaceantigen(HBsAg)．MethodsPositive，ne

4、gativeandweaklypositivemixedserumweredetectedunderdifferentdilution，platewashingtime，incubationtimeandcolortime．ResultsWithonedroporwithoutdilutesolution，incubationtimeshortenedrespectivelyto45and15minafteraddingserumoren—zymeconjugates，colortimechangedto15minwithchromogenicagents，

5、theweaklypositiveresultwasstatisticallydifferentwithstandardmethods．Thepositive，weaklypositiveandnegativeresultswerealsostatisticallydifferentwithstandardmethodswhenplatewaswashedafterincubationfor1h．ConclusionThechangesofEIISAcondi—tionsmighthaveobviouseffectonweaklypositivesample

6、sespeciallythosewithincriticalvaluerange(grayzone)，thoughtheeffectcouldbeignoredinpositiveones．[Keywords]HBsAg；ELISA；two—stepdetection；influencingfactors血筛4项[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病空白孔外每孔加入酶标试剂5O“I，轻轻振荡混匀；(5)温育，毒抗体(抗一HCV)、人免疫缺陷病毒抗体(抗一HIV)、梅毒]两步封板后置(37±1)℃温育(30±1)min；(6)洗板，洗板机洗涤5法纳入

7、2010年4月颁布的新药典，自2010年1O月1日起上遍，扣干；(7)显色，每孑L加入显色剂A、B液各5oL．轻轻振荡市的试剂全部采用两步法，同时废除其他方法。本室于2011混匀，(37±1)℃避光显色(30±1)min；(8)测定，每孔加入终止年3月开始采用两步法对血筛4项进行检测。为了了解两步液5OL，轻轻振荡混匀，10min内测定结果。法的影响因素，以HBsAg为例，在不同条件下进行检测，现报1．3．2滴加l滴稀释液除“(1)稀释”一步中稀释液改为直道如下。接用滴瓶滴加1滴外，其余步骤同标准方法。1材料与方法1．3．3无稀释液除“(1)稀释”一步中不加

8、入稀释液外，其1．1标本来源于本院住院和门诊乙型肝炎