贴壁培养与悬浮培养的区别.ppt

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1、贴壁细胞培养与悬浮细胞培养的区别蔓荆子2013.11.08概念细胞类型接种方式培养条件细胞形态生长过程传代培养贴壁细胞培养：细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。悬浮细胞培养：细胞生长不依赖于支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。1概念2细胞类型适合贴壁培养的细胞：包括原代细胞在内的大多数细胞类型。主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等适合悬浮培养的细胞：适应悬浮培养的细胞及无粘附的细胞。一

2、些取自血、脾或骨髓的培养细胞，尤其是血液白细胞，淋巴细胞。植物细胞。3接种方式贴壁培养PBS冲洗血液，去掉脂肪组织，切成小块，消化液消化，培养液培养。植物细胞的悬浮培养由完整的植物器官分离单细胞机械法酶解法由愈伤组织分离单细胞水曲柳悬浮细胞系的建立1丁小萌，闫俊崎，周博，齐凤慧。水曲柳愈伤组织诱导及悬浮细胞系的建立。中国农学通报，2013,29（25）:21-25香花槐愈伤组织及悬浮培养的细胞1胡海英，赵亚美，阎晓磊，王华芳。香花槐愈伤组织及细胞悬浮培养技术。北京林业大学学报，2007,29（5）:2

3、6-304培养条件贴壁细胞培养悬浮细胞培养容器需要使用经过组织培养处理的容器使用未经过组织培养处理的容器，但需搅拌或摇晃设备贴壁细胞培养悬浮细胞培养温度人和哺乳动物细胞系：36-37℃昆虫细胞系：27℃禽类细胞系：38.5℃冷血动物：15-26℃植物悬浮细胞系：23-27℃pH哺乳动物系：7.0-7.4成纤维细胞系：7.4-7.7植物细胞：5.6-6.0培养基需血清悬浮培养基可不需血清5细胞形态贴壁培养细胞：成纤维细胞型上皮细胞型游走细胞型多型细胞型悬浮培养细胞：悬浮型成纤维细胞型名称：凡在培养中形态

4、与成纤维细胞类似的。来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞，心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮。形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。人心肌细胞人绒毛间充质成纤维细胞上皮细胞型名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同。来源：来源于外胚层、内胚层细胞,如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿

5、瘤。形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核。生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。人大肠上皮粘膜癌细胞人小气道上皮细胞游走细胞型生长特点：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。小鼠腹腔分离的单核巨噬细胞多型细胞型生长特点：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。大鼠皮质神经细胞胎鼠神经干细胞皮层神经细胞人PBMC细胞悬浮培养细胞淋

6、巴母细胞T淋巴细胞白血病细胞岷江百合细胞继代4次后的文冠果细胞悬浮培养初期的棉花细胞分裂旺盛的胡萝卜细胞1姜新超，刘春。岷江百合悬浮细胞系的建立及植株再生。园艺学报，2011,38（2）:327-3342刘磊，顾玉红。文冠果悬浮细胞系建立及细胞生长特性。林业科学，2011,46（9）：79-836生长过程潜伏期：悬浮,胞质回缩,全部细胞变为圆球形。贴附底物。有运动活动,基本无增殖,少见分裂相。指数增长期：是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一。停滞期：细胞数量达饱和

7、密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。7传代培养贴壁细胞酶消化法传代：弃去培养液，加胰酶消化，加培养液终止胰酶作用，离心，去上清，吹打成悬液，分装传代。悬浮细胞离心法传代：离心，弃上清液，加新鲜培养基，分装传代。直接传代法：待细胞沉淀，倾去1/3-2/3培养液，用吸管吹打形成细胞悬液再传代。贴壁培养悬浮培养适合包括原代细胞在内的大多数细胞类型适合已适应悬浮培养的细胞以及其他一些无粘附性的细胞需要定期传代，但是易于通过倒置显微镜观察。显微镜下观察形态多种。晃动培养液时，细胞不动较易传代，但是需要每天进行细

8、胞计数和存活率测定。显微镜下观察呈圆形。晃动培养液时，细胞也随着漂动利用酶或机械方法解离细胞无需通过酶或机械方法解离细胞需要使用经过组织培养处理的容器可使用未经组织培养处理的容器，但需进行搅动以便进行充分的气体交换可连续收获产物，用于细胞学研究等多种研究领域可批量收获产物，用于蛋白质的大量生产及多种研究领域细胞生长受表面积限制细胞生长受培养基中浓度的限制谢谢