小熊猫卵巢肥大细胞与雌性生殖干细胞的初步观察.pdf

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1、动物医学进展，2015，36(6)：96—99ProgressinVeterinaryMedicine小熊猫卵巢肥大细胞与雌性生殖干细胞的初步观察修云芳，王全溪¨，邵良平。，李碧春，徐素慧。，陈玉村(1．扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009；2．海峡(福州)大熊猫研究交流中心，福建福州350001；3福建农林大学动物科学学院，福建福州350002)摘要：为了解小熊猫卵巢肥大细胞分布情况，收集15只成体小熊猫的卵巢，按常规组织学技术制作组织切片。根据甲苯胺蓝染色结果，肥大细胞主要分布于血管壁与卵泡动脉外膜的结缔组织中，其数量随着发情

2、周期呈规律性变化，发情期最高，乏情期次之，妊娠期数量最少，不同时期之间肥大细胞数量差异极显著(P<0．01)；阿尔新蓝一番红花红(AB-S)染色将肥大细胞可分为黏膜型、结缔组织型与混合型。肥大细胞可能对小熊猫的受精，胚胎着床，妊娠有调节作用。免疫组化染色显示，小熊猫卵巢有组胺阳性细胞，这些细胞分布也是随着发情周期呈规律性变化，卵母细胞和生殖上皮细胞呈现小鼠脉管同系物(MVH)阳性反应，说明小熊猫卵巢内存在生殖干细胞。关键词：小熊猫；卵巢；肥大细胞；生殖干细胞中图分类号：$857．21文献标识码：A文章编号：1007—5038(2015)06—

3、009604肥大细胞(mastcells，MCs)来源于骨髓造血干小鼠脉管同系物(mousevasahomolog，MVH)细胞，通常分布于皮肤下层、呼吸道、消化道黏膜以是果蝇vasa基因的同源类似物，其编码产物是一个及黏膜下的血管、淋巴管周围的结缔组织中口]。据DEAD家族的RNA解旋酶。MVH首先从小鼠的报道，卵巢MCs的数量与分布因发情周期不同而PGC中克隆出来，随后在各阶段的生殖细胞中均检呈规律性改变，研究表明这些细胞参与卵巢功能的测到了其表达，MVH基因缺陷型小鼠的生殖细胞局部调节E引。在生理条件下，MCs内有相当量的组出现分化停滞

4、和凋亡现象，同时Oct4基因的表达水胺。据报道，发情前期大鼠与仓鼠卵巢肥大细胞及平也随之降低，小鼠失去生殖能力。因此MVH作脱颗粒数量增加导致卵巢组胺含量增加。有研究表为一个在生殖细胞发育中起重要作用的基因，被公明热应激导致肥大细胞数量与组胺含量同时增认为是生殖细胞的特异标志基因。小熊猫卵巢组织加口]。MCs衍生物一组胺参与刺激排卵、卵巢的血学结构已有报道l_7]，但无小熊猫卵巢FGSCs、MCs液循环及毛细血管通透性改变。及组胺分布的报道。本研究收集15例不同时期小雄性哺乳动物，由于精原干细胞(germlinestem熊猫卵巢，观察其中FG

5、SCs及肥大细胞分布与数cells，GSCs)的存在，精子发生可以贯穿整个生命周量，为了解MCs在小熊猫生殖过程中的作用提供理期。自从20世纪50年代始，以美国科学家Zucker—论依据。man提出的哺乳动物卵巢“固定卵泡库”理论占主导1材料与方法地位，认为哺乳动物雌性配子的发生仅出现于胚胎1．1材料发育期，出生后卵巢中生殖细胞已发育到了原始卵1．1．1动物15只来自福州某地的因非生殖系统泡阶段，并停止于第一次减数分裂的双线期，之后这疾病死亡的小熊猫。按照动物所处不同生理周期将些卵泡凋亡或者待休眠一段时间后重新启动发育，卵巢样本分组：发情期4

6、个，乏情期7个，妊娠期4雌性哺乳动物出生后没有卵子再生_4]。然而，最近个。研究发现成年哺乳动物的卵巢内存在雌性生殖干细1．1．2主要试剂甲苯胺蓝、阿尔新蓝Alcianblue胞(femalegermlinestemcells，FGSCs)且能生成新8GX、番红花红SafranineO为上海化学试剂厂产的卵母细胞j。品；鼠抗组胺抗体为美国Sigma公司产品；鼠抗收稿日期：2014—10-26基金项目：福建省生物技术科技项目(2oo0Z156)作者简介：修云芳(1973一)，女，博士研究生，高级兽医师，主要从事小熊猫繁殖疾病研究。*通讯作者修云

7、芳等：小熊猫卵巢肥大细胞与雌性生殖干细胞的初步观察97MVH抗体、兔抗小鼠IgG1为北京博奥森生物技术2．2小熊猫卵巢MCs的形态与类型有限公司产品。小熊猫卵巢MCs呈圆形，椭圆形或者不规则形1．2方法(图2A)。苯甲胺蓝染色呈异染性，胞质中充满紫色1．2．1样品收集与处理将卵巢切成约1．5cm×粗糙颗粒，细胞核小，呈圆形或椭圆形，位于细胞中1．5cm×0．5cm大小组织块，浸泡在40mL／L福尔间或偏于一侧。MCs分布在血管壁或者卵泡周围马林中，4℃保存4h。按常规组织学技术制备石蜡的结缔组织中。发情期与乏情期它们大多分布在皮切片，以5m厚

8、度半连续切片。质区与卵泡周围(图2A、2C)，发情期MCs较乏情1．2．2肥大细胞染色组织块贮存在Carnoy’S固期(图2B)与妊娠期大。AB-S染色异染颗粒呈蓝