纤维连接蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞整合素α4β1表达的影响.pdf

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1、1060河北医药2015年4月第37卷第7期HebeiMedicalJournal,201ol!pr：!doi：10．3969／j．issn．1002—7386．2015．07．034·论著·纤维连接蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞整合素oL4131表达的影响胡艳吴瑜瑜【摘要】目的探讨纤维连接蛋白(FN)对体外培养的原发性开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞整合素B1表达及细胞存活的影响。方法对照实验研究，体外培养POAG患者小梁网细胞，分男l1加入不同浓度的FN培养。采用免疫细胞化学法观察各组细胞整合素a4131的表达及细胞存活情况。结果随着FN浓度增加，整合素Bl表达增强；

2、在FN低浓度范围内阳性细胞面积增多。结论FN影响小梁网细胞肌动蛋白骨架及其细胞连接，改变来参与房水流出的调节过程。【关键词】小梁网细胞；原发性开角型青光眼；纤维连接蛋白；整合素a41~1；免疫细胞化学法【中图分类号】R775．2【文献标识码】A【文章编号】1002—7386(2015)07—1060—02纤维连接蛋白(FN)在原发性开角型青光眼(PO-按照UltraSensitiveTMSP超敏试剂盒实验步骤操作，AG)患者小梁网细胞中高表达，提示FN对POAG的直至二氨基联苯胺显色。发生可能起重要作用J。小梁网细胞骨架对调节房1．3结果判断镜下观察整合素4B1的表达，以出水流出起

3、一定作用，其主要成分肌动蛋白是通过改变现棕色染色为阳性标准，实验重复3次。封片后每张小梁网细胞收缩特性，削减小梁网细胞之问、细胞与基切片随机取10个视野输入计算机，采用MetaMorph免质之间的连接_2J，本研究采用免疫细胞化学方法检测疫组化显微图象分析系统在200倍视野范围随机选取FN对POAG病态小梁网细胞整合素a4131分泌的调节10个视野计算平均吸光度值。及细胞存活的影响，探讨其与POAG发病机制的关系。1．4统计学分析应用SPSS17．0统计软件，计量资1材料与方法料以±s表示，进行one—wayANOVA检验，两两比较1．1标本来源与处理体外细胞培养组织块来自福采用S

4、NK检验，P<0．05为差异有统计学意义。建医科大学第二临床医学院眼科2008年9月至20092结果年6月确诊的3例POAG患者，对小梁切除术后取得2．1FN对POAG患者小梁网细胞整合素B1表达的带小梁网组织块进行细胞培养，符合人体细胞实验的影响随着FN浓度增加，整合素B1表达增强。的伦理学标准。患者年龄分别为45、48、51岁，无高血在5g／m1纤维连接蛋白培养的小梁网细胞细胞核染压、糖尿病、传染性和遗传性疾病史。色为蓝色，细胞胞浆为蓝色可见淡棕色颗粒，表达很1．2主要试剂及方法UhraSensitiveTMSP超敏试剂少，在10g／ml纤维连接蛋白培养的小梁网细胞胞浆盒，DA

5、B显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限棕色加深，随着纤维连接蛋白的浓度的增加，细胞核始公司。纤维连接蛋白购自CHMICON公司，整合素终为蓝色，细胞胞浆为棕色逐渐加深。见表1，图1。0~4131抗体购自ABCAM公司。在6孔培养板上铺盖2．2FN对POAG患者小梁网细胞存活的影响随着玻片，用不同浓度的VN(0、5、l0、20、40、100s／m1)包FN浓度增加，在FN低浓度范围内(0—100g／m1)阳被，将小梁网细胞接种于6孔板，每组2个复孔，调整性细胞面积增多。见表2。细胞浓度为2．5×10ml。无血清培养液培养1d3讨论后，使细胞同步化，取出盖玻片，PBS充分漂洗。然后整

6、合素由不同仅与B亚基组成，亚基与配体识别有关，B亚基将信号传导至细胞骨架，是许多细胞增项目来源：福建省教育厅科技项目(编号：JA07107)；泉州市技术研生和迁移的基础j。FN是小梁网组织的细胞外基质究与开发项目(编号：2007Z18)主要成分，广泛存在于Schlemm管内壁的基底膜和小作者单位：362000福州市，福建医科大学附属第二临床医学院梁网近管组织，并且是房水的一种可溶性蛋白，是细胞(胡艳现工作单位为长沙爱尔眼科医院)外基质重要组成部分。小梁网细胞的黏附及肌动蛋白通讯作者：吴瑜瑜，362000福州市，福建医科大学附属第二临床医学院；的收缩主要由FN上两个特殊的区域调节：C

7、ellI结合E—mail：wuyy62@tom．corn域和Hep1I结合域J。HepII结合域主要与整合素