美国能源部NREL-测三素标准.doc

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1、NREL法测定纤维素、半纤维素及木质素的含量（版本日期：2008-4-25）一、准备工作1、72%（w/w）硫酸的配制（100g）98%的浓硫酸：72/98%=73.5g水：100−73.5=26.5g注意：先加水后加硫酸！2、器皿125mL白口瓶（72%硫酸）水解瓶（配橡胶盖、铝盖）G3玻砂漏斗二、测定步骤1、称取0.3000±0.001g的绝干原料加入水解瓶，标记，做平行样；2、加入3.00±0.01mL的72%硫酸，搅拌至原料充分混合。混匀后置于30±3℃的水浴中保温60±5min，每5~10min搅拌一次；3、取出加入84±0.04mL

2、去离子水稀释到4%，盖紧旋钮，颠倒混匀；4、做sugarrecoverystandards（SRS）校正糖在酸解时的损失。配制糖溶液，包括：葡萄糖，木糖（浓度越接近酸解样品中的糖浓度越好）。称取各种糖精确至0.1mg至水解瓶，加入10mL去离子水，加入348μL的72%硫酸，旋紧旋钮。和酸解样品灭菌锅121℃，1h，取出冷却后打开；5、酸水解后使用G3玻璃器皿真空过滤，取50mL滤液测量酸溶木质素，纤维素和木聚糖含量；6、使用热的去离子水洗涤过滤后残渣到中性，在烘箱105±3℃，干燥至绝干，称量记录。干燥后转移到马弗炉中，575±25℃灼烧24

3、±6h测量灰分。取出冷却至室温后称重记录。每个样品取平行对照。由此得到酸不溶木质素的含量：酸不溶木素含量(AIL%)=(G2−G1)×(1−Extra%)/[G(1−W)]×100%其中：G2为过滤后残渣和玻璃滤器的绝干重量g，G1为灼烧后的灰分和玻璃滤器的重量g，G为水解样品质量g，W为水分含量，Extra%代表抽提物的含量。7、测量酸溶木质素的含量在酸解6h内进行。过滤后得到的滤液，用4%的硫酸做空白对照，使用紫外分光光度计测量，205nm下测量吸光值，稀释相应倍数，使得其吸收值在0.7~1.0。稀释的时候使用4%稀硫酸，吸收值重复性要在±

4、0.05，每个样品取平行对照，由此得到酸溶木质素的含量：酸溶木质素含量(%)=D×A×V/(110×W)×100%其中：D为稀释倍数，A为紫外吸收值，V为滤液的总体积0.087L，110为吸收系数，W为样品的绝干重g。8、过滤后得到的液体，取20mL到锥形瓶，使用NaOH调节pH5~6，稀释适当倍数后使用0.2μm过滤膜过滤，HPLC分析糖含量。得到纤维二糖，葡萄糖和木糖等糖浓度。每个样品取平行对照。调pH经验方法：1mL样品+40μL50%（w/v）氢氧化钠后pH至1～3之间。纤维素含量(%)=Cglu×0.9×V×(1-Extra%)/W×

5、100%其中：Cglu为校正后葡萄糖浓度g/L，0.9为C6单糖和聚糖的转化系数，V为滤液的总体积0.087L，Extra%代表抽提物的含量，W为样品绝干重g。校正公式为：葡萄糖：Cglu=1.0657CHPLC−0.0038；Cglu=1.0683CHPLC+0.0041木糖：Cxyl=1.1816CHPLC−0.0098；Cxyl=1.1745CHPLC−0.0083阿拉伯糖：Cara=1.1057CHPLC−0.0178；Cara=1.0992CHPLC+0.0011葡聚糖含量（%）=（Cglu×0.9×V/W）×100%木聚糖含量（%）

6、=（Cxyl×0.88×V/W）×100%式中：Cglu—校正后葡萄糖的浓度，g/L；0.9—葡萄糖和葡聚糖的转换系数；.0.88—木糖和木聚糖的转换系数；Cxyl—校正后木糖的浓度，g/L；V—滤液总体积0.087，L；W—样品绝干重，g。