青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长cDNA序列的克隆及表达分析.pdf

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1、中圊患雩c丕报2015，31(17)：28—37ChineseAgriculturalScienceBulletin青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长cDNA序列的克隆及表达分析袁晖，周巧，张世勇，傅洪拓12，孙盛明，乔慧，张文宜(‘南京农业大学渔业学院，江苏无锡214081：2中国水产科学研究院淡水渔业中心，江苏无锡214081)摘要：本研究首次克隆了青虾的Usp9(ubiquitin—specificprotease9)基因全长cDNA序列，并在青虾中使用荧光定量PCR技术首次检测了Usp9基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾

2、Usp9基因cDNA全长1259bp，包括162bp的5’UTR，978bp的开放阅读框以及l16bp的3’UTR。氨基酸序列比对分析显示，青虾Usp9蛋白与太平洋牡r~i(Crassostreag)、凤仙花熊蜂(Bombusimpatiens)~灰短尾负鼠(Monodelphisdomestica)的蛋白相似度分别为99％、97％和95％。应用MEGA5．1软件对青虾与其他物种的Usp9氨基酸进行系统进化树分析，结果表明，青虾Usp9与同为甲壳纲的钩额型蚤状潘聚为一支，具有最近的亲缘关系。采用荧光定量PCR技术检测了Usp9基因的时空表达

3、，水温28℃时，Usp9基因在青虾发育的后幼体发育期第5天PL5出现表达高峰。Usp9基因在6种成体组织中均有表达，表达水平依次为：脑>腹神经>精巢>卵巢>肌肉>肠。而在雌雄组织差异表达分析表明，精巢中Usp9基因表达量比卵巢的比值为2．86，脑组织中雄虾的表达量比雌虾为2．27，差异均为极其显著<0．01)。这表明Usp9基因的表达和雄性偏向基因趋势是一致的(雄性表达：雌性表达≥1．5)。本研究为进一步开展青虾Usp9基因功能等相关研究奠定了基础，并可为青虾性别的遗传调控机制研究提供参考。关键词：青虾；泛素特异性蛋白酶9；基因克隆；时空表

4、达中图分类号：S9文献标志码：A论文编号：2013-1284Full-LengthcDNACloningandSpatial_-TemporalExpressionAnalysisofUbiquitin—-SpecificProtease9GeneinOrientalRiverPrawn，MacrobrachiumnipponenseYuanHui。，ZhouQiao，ZhangShiyong，FuHongtuo，SunShengming，QiaoHui，ZhangWenyi(FisheriesCollege，№ngAgricultureU

5、niversity，WuxiJiangsu214081；FreshwaterFisheriesResearchCenter,ChineseAcademyofFisherySciences，WuxiJiangsu214081)Abstract：Inthisstudy，thefull—lengthcDNAsequencewasclonedandspatial—temporalexpressionpatternofUsp9wasdetectedbyquantitativereal—timePCR(qRT—PCR)forthefirsttimefr

6、omthetestisoforientalriverprawnMacrobrachiumnipponense．Thefull—lengthcDNAsequenceofgsp9is1259bp，containinganopenreadingframeof978bp，162bpof5’一untranslatedregion(UTR)，116bpof3一UTRwithapoly(A)tail．Thededucedaminoacidsequenceof脚9shares99％，97％and95％similaritytoCrassostreagigas

7、，BombusimpatiensandMonodelphisdomestica，respectively．ThephylogenetictreebasedonotherspeciesUsp9proteinsshowedthatUsp9fromtestisofMnipponensesharedtheclosestrelationshipwithDaphniapulex．qRT—PCRanalysisdemonstratedthattheexpressionlevelsof【尽D9innipponensereachedthepeakinthe5

8、dayofthe基金项目：江苏省高技术研究项目“青虾新品系的选育”(BG2007328)；中央级科研院所基本科研业务费专项“青虾精巢均一化构建及表达序列标签分析”(2Ol1JBF