尖镰孢菌细胞色素P45055A1与NO相互作用的荧光光谱法研究.pdf

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1、第34卷第2期中南民族大学学报(自然科学版)Vo1．34No．22015年6月JournalofSouth—CentralUniversityforNationalities(Nat．Sci．Edition)Jun2015尖镰孢菌细胞色素P45055A1与NO相互作用的荧光光谱法研究吴云华，刘倩(中南民族大学生命科学学院，武陵山区特色资源植物种质保护和利用湖北省重点实验室，武汉430074)摘要以大肠杆菌为宿主表达了尖镰孢菌细胞色素P45055A1(CYP45055A1)，并采用荧光光谱法研究了其与NO的相互作用．结果表明：在大肠杆菌(DE3)中成功表达了具有酶

2、活性的CYP55A1．在280nm波长激发下，NO的加入使CYP55A1的荧光逐渐降低，但随温度的变化差异较小；在413nm波长激发下，NO的加入使CYP55A1的荧光逐渐升高，但加入NADH后其荧光又恢复到原来的值．关键词细胞色素P45055A1；原核表达；一氧化氮；荧光光谱法中图分类号Q51文献标识码A文章编号1672-4321(2015)02-0028-05TheInteractionbetweenCytochromeP45055A1fromFusariumoxysporumandNObyFluorescenceSpectrometryWuYunhua，L

3、iuQian(HubeiProvincialKeyLaboratoryforProtectionandApplicationofSpecialPlantsinWulingAreaofChina，CollegeofLifeSciences，SouthCentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China)AbstractCytochromeP45O55A1(CYP55A1)fromFusariumoxysporumwasexpressedinEcoli，andtheinteractionbetweenCYP55A1a

4、ndNOwasstudiedbyfluorescencespectrometry．TheresuhsindicatedthatCYP55A1wereexpressedinE．coli(DE3)successfully．Undertheexcitationat280nm，thefluorescenceintensityofCYP55A1decreasedgraduallywiththeadditionofN0butvailedmarginallywithtemperature．Undertheexcitationat413nm，thefluorescenceint

5、ensityincreasedgraduallywiththeadditionofNObutwouldrecoverwiththeadditionofNADH．KeywordscytochromeP45055A1；prokaryoticexpression；nitricoxide；fluorescentspectrometry来自于尖镰孢菌的细胞色素P45055A1最早由征、能量转移和荧光寿命等指标可以对蛋白质分子Shoun．H等人在真菌的反硝化作用中发现⋯，它属中荧光生色基团的结构及其所处的微环境提供有效于NO还原酶(即P450nor)，不同于大多数具有单加信

6、息】．本文以大肠杆菌为宿主表达尖镰孢菌细胞氧酶活性的P450酶系，与NO结合形成中间复合物色素P45055A1酶，通过荧光光谱法，研究了CYP55A1一NO，在NADH的参与下，将NO还原为一CYP55A1酶与NO的相互作用，并验证了CYP55A1氧化二氮(NO)，且不需要其他电子供体蛋白的对NO的催化机理．参与j．CYP55A1的发现、分离、晶体结构功能和催化机制已被详细报道引，如CYP55A1基因在日1材料和方法本晴中的超表达，但NO与P450nor相互作用及机制目前是通过紫外可见光谱来验证，通过荧光1．1材料和仪器光谱进行的研究还未见报道．蛋白质荧光发射峰

7、特基因CYP55A1为本实验室从尖镰孢菌中克隆收稿日期2014—12-27作者简介吴云华(1971．)，女，教授，博士，研究方向：生化分析与生物传感，E—mail：wuyunhua@mail．scuec．edu．cn基金项目湖北省自然科学基金资助项目(2014CFB381)；中央高校自然科学基金资助项目(CZW14008)第2期吴云华，等：尖镰孢菌细胞色素P45055A1与NO相互作用的荧光光谱法研究29得到，载体pET-28a、PCW-55A1及大肠杆菌E．coli终浓度为1mmol／L的IPTG，16oC诱导表达22h．DH5ot和E．coliBL21(DE

8、3)均由中南民族大学武陵