鸡新城疫免疫抗体水平评价试验.pdf

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1、Nong一一旦一_K曼一一．⋯⋯—一一鸡新城疫免疫抗体水平评价试验马瑞(乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站，鸟鲁木齐831400)鸡新城疫是养鸡业最常见的一种急性高度接触③pH值7．2、0．Ol摩尔／升PBS等渗液配制配性、败血性传染病。此病的特征是鸡呼吸困难、下痢，制lxPBS：量取40毫升25xPBS，加入8．5克氯化神经紊乱，黏膜和浆膜出血坏死，精神沉郁，离群呆钠，加蒸馏水定容至1000毫升。立，突然采食减少或不食，饮欲增加，眼半闭或全闭，3．试验方法产蛋鸡产蛋减少或停产，呼吸困难，常排出黄绿色或参照GB／T18963—2

2、003(高致病性新城疫诊断技黄白色的稀粪，发病后期排出蛋清样排泄物。病原剖术》中的血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验进行。检．全身黏膜和浆膜出血。淋巴系统肿胀、出血和坏4．血凝试验(HA)(微量法)测定死。嗉囔内有充满臭味的稀薄液体和气体，腺胃黏膜在微量反应板的112孔均加入0．025毫升水肿，其乳头或乳头间有鲜亮的出血点，或有溃疡或PBS，换滴头，吸取0．025毫升病毒悬液(鸡新城疫血坏死．腺胃和肌胃交界处有出血点。这是典型新城疫凝抑制试验抗原)加入第l孑L，混匀。从第1孔吸取的特征病变。鸡新城疫对养鸡业的发展危害严重

3、，典0．025毫升病毒液加入第2孑L，混匀后吸取0．025毫型鸡新城疫的发病率和病死率可达9O％以上。升加入第3孑L，如此进行倍比稀释至第11孑L．从第一、材料与方法1l孔吸取0．025毫升弃之．换滴头。每孔再加入1．试验材料0．025毫升PBS。每孔均加入0．025毫升体积分数为①试验对象乌鲁木齐市某养禽场鸡新城疫免1％鸡红细胞悬液f将鸡红细胞悬液充分混匀后加疫后的ND抗体水平评价。入)。振荡混匀，在室温20～25。【=下静置40分钟后，观②疫苗重组新城疫灭活疫苗。察结果。如果环境温度太低或者太高，可置25℃温箱③试剂

4、新城疫血凝抑制试验抗原，新城疫血环境下。对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。凝抑制试验阳性血清，1％鸡红细胞悬液，阿氏液，pH①结果判定将反应板微倾斜，观察红细胞有值为7．2、0．01摩尔／升PBS等渗液等其他试剂自配。无呈泪滴状流淌，完全血凝(不流淌)的抗原或病毒④试验器材一次性96孑LV型微量反应板，移最高稀释倍数代表1个血凝单位(HAU)。此试验中液器(25微升，500微升，1000微升)，替补头，微量振抗原血凝效价为1：256。荡器，台式离心机，移液槽，烧杯，量筒，电子秤。②四单位抗原配制根据血凝(HA)试验结

5、果2．相关试剂配制配制4HAU病毒抗原。以完全血凝病毒最高稀释倍①阿氏液(抗凝血)配制葡萄糖2．05克，柠檬数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU抗酸钠0．80克，柠檬酸0．055克，氯化钠0．42克，加蒸原稀释倍数。所以，4HAU抗原稀释倍数为1：64。馏水至100毫升，散热溶解后pH值调至6．1，69千③血凝抑制(HI)试验(微量法)在微量反应板帕、l5分钟高压灭菌。4℃保存备用。l～ll孔加入0．025毫升PBS．第12孑L加入0．05毫升②1％鸡红细胞悬液制备用有抗凝剂的注射PBS。吸取0．025毫升被检血

6、清加入第1孑L内，充分器采血5～10毫升，将血液吸入离心管中，经3000混匀后吸0．025毫升于第2孔，依次倍比稀释至第转离心5～10分钟，吸取上清液和红细胞上层白细胞1O孔．从第10孔吸取0．025毫升弃去。1～11孔均加薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液洗涤，再加3000转入含4HAU混匀病毒抗原液0．025毫升，室温(约离心5～10分钟，反复3次。将最后1次离心后的细20～25℃)静置至少30分钟。每孔加入0．025毫升胞泥按5％稀释。体积分数为1％鸡红细胞悬液混匀，静置约40分钟，70农村科技2013(7)望一_C一一

7、曼一一一一室温约2O～25℃。如果环境温度太低或者太高，可置意稀释血清时避免产生气泡及将孔内液体溅出．每25℃温箱环境下．对照孑L红细胞将呈明显钮扣状沉孔稀释次数也要严格保持一致。到孔底。②待检血清要求必须新鲜、无杂质、无红细胞、④结果判定原则以完全抑制4个HAU抗原不腐败，盛血清的离心管使用前需要高压消毒。保证血清最高稀释倍数作为HI滴度。只有阴性对照孔血血清存放时间，分离血清时应有备份血清。清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过12．发生新城疫的原因个滴度。试验结果才有效。HI价小于或等于31og2，判发生

8、新城疫的原因主要与早期感染、超强毒感定HI试验阳性：等于41og2为可疑，需重复试验；大染、免疫失败、母源抗体的影响、变异病毒的出现和于或等于51og2为阴性。免疫抗体保护率达70％以免疫抑制性疾病的存在有关。上则认为具有较强的免疫保护力。3．预防措施二、结果与分析①严格检疫，发现病鸡立即淘汰，饲养场地彻底被检测96