鸡传染性支气管炎诊断方法研究进展及应用概况.pdf

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1、第35卷第1期中国预防兽医学报VOl_35．NO．12013年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2013doi：10．3969~．issn．1008-0589．2013．01．19鸡传染性支气管炎诊断方法研究进展及应用概况粟硕，张桂红(华南农业大学兽医学院，广东广州510642)中图分类号：$852．65文献标识码：B文章编号：1008．0589(2013)01．0077．04鸡传染性支气管炎(Avianinfectiousbro

2、nchitis，IB)是由可以放大或显现出病毒在活体中不明显的细胞病变效应[3]。冠状病毒科冠状病毒属中的IB病毒(IBV)引起的鸡的一种1．2电镜的病毒检测电镜技术可以直观、准确的鉴别急性高度接触性呼吸道传染病。该病首先由Schalk等于病毒，根据病毒的形态、结构和大小等不同特征，可以1931年在美国发现_11，我国于1972年由邝荣禄等首次在做出诊断。将感染鸡组织、器官或分泌物做常规负染色广东报道；目前该病呈世界性流行，是危害养禽业的重进行电镜观察，IBV病毒粒子直径90am～2o0nln，

3、囊大传染病之一。目前已发现IBV近30种血清型，常见的膜表面具有许多间距较宽的杵状突起，长约20nnl，排列有M41、Conn、Iowa97等，我国流行的IBV类型主要为成冠状。该方法直观、快速，但该方法比较复杂，一般M型[2]。此外，新的血清型在不断的出现，不同血清型的仅限于以研究为目的的应用。IBV之间仅有部分或完全没有交叉免疫保护，不同血清型的临床症状和病理变化存在差异，伴有混合感染、继2血清学诊断技术发感染等因素，给IB的免疫检测和免疫预防带来了很大困难。因此，为有效地控制IBV的流行，

4、快速准确的检2．1传统血清学试验测方法区别不同IBV血清型致病毒株具有重要意义。2．1．1琼脂扩散试验(AGP)自1966年Woemle将AGP标准化以来，该方法被广泛应用于1BV的抗体检测，鸡1病原学诊断方法群中IBV抗体阳性率上升则表示存在IBV新近感染发生[4】。但该方法敏感性低，而且鸡群中免疫IBV后的沉淀性抗1．1病毒的分离鉴定IBV的分离鉴定被认为是检测病体持续时问短；同时，抗原的制备处理是试验成功的关原的金标准，因该方法比较耗时，而且所需材料成本较键因素之一。封文海等认为，用感染I

5、BV的鸡胚尿囊液高，一般作为新方法建立的验证方法。常用气管环培养和绒毛尿囊膜制备琼扩抗原，并以感染IBV后20h～30h和细胞培养分离病毒。气管环培养时，采用18~20日龄的绒毛尿囊膜和感染IBV后48h～60h的尿囊液效果最鸡胚，制备1mlYl厚气管环做旋转培养，3感染IBV1d～佳_51。该方法简便快捷，特异性强，不受病毒亚型限制，4d，纤毛运动停止，继而上皮细胞脱落。该方法可以作但敏感性并未提高。为IBV分离和滴定，并适用于不易在鸡胚中增殖IBV分2．1．2血凝抑制试验(Ⅲ)该方法适用于I

6、B的快速诊断，离株。在鸡胚气管组织培养中第1代即能够很快产生纤在临床中可作为辅助性的检测手段，具有简便、快速的毛止动效应，无需多次传代培养；细胞培养分离病毒时，特点。但血凝抑制试验需要一系列方法处理抗原，并且可用于IBV分离鉴定的细胞有Vero细胞、气管上皮细胞m滴度与保护力在免疫期并不相关。所以，该方法用于(CTE)、鸡胚肾细胞(CEK)等。2002年报道肾型IBV在IBV诊断仍需深入研究。Marc145细胞获得了适应。孙裴等利用气管灌注冷消化法2．1．3病毒中和试验(Vl,Cr)通常应用已知

7、病毒检查待分离培养出CTE，并报道肾型T株和呼吸型M41株均能检血清中的特异性抗体，该方法操作简便，可在鸡胚、够在CTE中获得适应培养，研究结果表明体外培养CTE鸡胚肾细胞或气管培养物中进行。判定标准有观察细胞收稿日期：2011-12．14基金项目：现代农业产业技术体系(CARS一36)作者简介：粟硕(1987．)，男，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，主要从事动物传染病研究通信作者：E—mail：guihongzh@scau．edu．ca78中国预防兽医学报2013焦病变、免疫荧光染色等多个标准，但

8、结果往往带有主观强金标免疫技术(SECGA)t”】。苏磊等利用IBVMAb及兔因素。抗IBV多抗建立了用于检测IBV的免疫胶体金诊断试纸2．2酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA检测法已被广泛条技术，该技术通过与IBV双抗夹心ELISA法比较，具应用IBV的检测，ELISA在IB的早期感染、持续感染中有较高的特异性、灵敏性、稳定性，并且可在加入待检均得到应用，并可以同时用于特性抗原和抗体的检测。样品15min后即可判定结果『l4】。在诊断方面，定期采血监测正常鸡群中IBV抗体的ELISA效价