小鼠白细胞素8(IL-8)elisa试剂盒使用说明书.doc

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1、小鼠白细胞介素8（IL-8）elisa试剂盒使用说明书小鼠白细胞介素8（IL-8）elisa试剂盒南京森贝伽生物优质试剂盒之一，森贝伽elisa试剂盒种类齐全，包括人elisa试剂盒、大小鼠elisa试剂盒、豚鼠elisa试剂盒、猪elisa试剂盒、兔elisa试剂盒，植物elisa试剂盒等种属elisa试剂盒，价格优惠，质量可靠，南京森贝伽提供elisa试剂盒免费代测服务，提供elisa试剂盒说明书、检测原理、用途等详细内容。小鼠白细胞介素8（IL-8）elisa试剂盒仅供研究使用，用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素

2、-8（IL-8）含量。检测范围：5pg/mL-100pg/mL保存条件及有效期：2-8℃。有效期：6个月小鼠白细胞介素8（IL-8）elisa试剂盒实验原理、样本处理及要求、操作步骤、注意事项如下：实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素8（IL-8）水平。用纯化的小鼠白细胞介素8（IL-8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素8（IL-8），再与HRP标记的白细胞介素8（IL-8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成

3、蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素8（IL-8）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素8（IL-8）浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：135pg/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1

4、瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次

5、离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入

6、一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取5

7、0μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90pg/mL，60pg/mL，30pg/mL，15pg/mL，7.5pg/mL）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同

8、）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将2