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时间:2020-05-14
《郜刚分子生物学03染色体2包装和半保留复制.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、2.3DNA的复制DNA—ReplicationandSynthesis第二章染色体与DNATransmissionelectronmicrographofhumanaHeLacell,illustratingthereplicationbubblethatcharacterizesDNAreplicationwithinasinglereplicon.APicturePaintsaThousandWords...ormore?Becauseafigureisasinformativeas1000words….DNAReplicationM
2、ode1.ThreePossibleModesofDNAReplication(1)Conservativereplication(全保留复制)(2)Dispersivereplication(分散复制)2.3.1DNA的半保留复制核酸复制规律的一般猜想在DNA复制时,DNA并不需要解链,只是在复制位点解开几个碱基,亲代分子保持完整。在这个模型中,亲代分子并不需要解链。亲代DNA分子先打成片段然后再互为模板,这样的话,亲代DNA片段分散在子代DNA分子中(3)Semiconservativereplication(半保留复制)unwound
3、rewoundBasematchGeneralizedmodelofsemiconservativereplicationofDNAMatthewMesselsonFranklinStahl中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试:请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的(8分)。Meselson-Stahl实验:1958年,Meselson和Stahl首先将大肠杆菌在含重同位素15N的培养基中培养约十五代,使所有细菌都被15N标记。然后移至只含有轻同位素14N的培养基中同步培养一代,二代,三代。分别提
4、取DNA,作CsCl密度梯度离心,观察DNA的位置。15N标记的DNA密度大于正常14N的DNA密度,在离心管较低的部位形成一条区带;正常的DNA应该在它的上面。这种重标记的DNA在14N培养液中复制一代,重密度带消失了,而在比正常DNA稍低的地方形成一个带,即中间密度带(如果是半保留复制,在第一代中,DNA是密度杂交分子,两条链中一条链是亲代15N标记的重链,另一条是正常含14N的轻链,这样两条链形成密度上杂交的DNA分子)。在14N培养液中再复制一代,就会出现两条带,一条在中间密度区域,一条在轻密度区域。随着在14N培养液中培养的代数的
5、增加,中间密度区的区带量逐渐减少,低密度区带的量逐渐增加,但并不出现新的区带。这个实验证明了DNA的复制是半保留复制。TheMeselson-Stahlexperiment.themostbeautifulexperimentinbiology15N标记氮源14N标记细胞在14N中复制一次细胞在14N中再复制一次细胞在14N中再复制一次TheexpectedresultsoftwogenerationsofsemiconservativereplicationintheMeselson-Stahlexperiment..Meselson-S
6、tahl实验的改进之一对15N-DNA、14N-DNA杂交分子经加热变性,对于变性前后的DNA分别进行CsCl密度梯度离心。结果变性前的杂交分子为一条中间密度带,变性后则分为两条区带,即重密度带(15N-DNA)和低密度带(14N-DNA)。第0代只有15N,第一代出现杂合分子,两代后出现等量的14N和14N-15N杂合分子。纯粹15N的分子没有的了,说明老链保留到了新链中了。3.SemiconservativeReplicationinEukaryotesTaylor-Woods-Hughesexperiments:1957,rootti
7、psofViciafaba(蚕豆)Radioisotope3HlabeledthymidineAutoradiography(放射自显影)蚕豆病是葡糖六磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏者进食蚕豆后发生的急性溶血性贫血。蚕豆(viciafaba)又名胡豆黄TelophaseResultsSemi-conservativereplicationofchromosomescanalsobevisualizedthroughanexaminationofchromosomesthatareallowedtworoundsofreplicationinam
8、ediumcontainingbromodeoxy-uridine.Thesereplicatedchromosomesarethenstainedwithafluorescen
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