郜刚分子生物学03染色体2包装和半保留复制.ppt

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1、2.3DNA的复制DNA—ReplicationandSynthesis第二章染色体与DNATransmissionelectronmicrographofhumanaHeLacell,illustratingthereplicationbubblethatcharacterizesDNAreplicationwithinasinglereplicon.APicturePaintsaThousandWords...ormore?Becauseafigureisasinformativeas1000words….DNAReplicationM

2、ode1.ThreePossibleModesofDNAReplication（1）Conservativereplication（全保留复制）（2）Dispersivereplication（分散复制）2.3.1DNA的半保留复制核酸复制规律的一般猜想在DNA复制时，DNA并不需要解链，只是在复制位点解开几个碱基，亲代分子保持完整。在这个模型中，亲代分子并不需要解链。亲代DNA分子先打成片段然后再互为模板，这样的话，亲代DNA片段分散在子代DNA分子中（3）Semiconservativereplication（半保留复制）unwound

3、rewoundBasematchGeneralizedmodelofsemiconservativereplicationofDNAMatthewMesselsonFranklinStahl中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试：请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的（8分）。Meselson－Stahl实验：1958年，Meselson和Stahl首先将大肠杆菌在含重同位素15N的培养基中培养约十五代，使所有细菌都被15N标记。然后移至只含有轻同位素14N的培养基中同步培养一代，二代，三代。分别提

4、取DNA，作CsCl密度梯度离心，观察DNA的位置。15N标记的DNA密度大于正常14N的DNA密度，在离心管较低的部位形成一条区带；正常的DNA应该在它的上面。这种重标记的DNA在14N培养液中复制一代，重密度带消失了，而在比正常DNA稍低的地方形成一个带，即中间密度带（如果是半保留复制，在第一代中，DNA是密度杂交分子，两条链中一条链是亲代15N标记的重链，另一条是正常含14N的轻链，这样两条链形成密度上杂交的DNA分子）。在14N培养液中再复制一代，就会出现两条带，一条在中间密度区域，一条在轻密度区域。随着在14N培养液中培养的代数的

5、增加，中间密度区的区带量逐渐减少，低密度区带的量逐渐增加，但并不出现新的区带。这个实验证明了DNA的复制是半保留复制。TheMeselson-Stahlexperiment.themostbeautifulexperimentinbiology15N标记氮源14N标记细胞在14N中复制一次细胞在14N中再复制一次细胞在14N中再复制一次TheexpectedresultsoftwogenerationsofsemiconservativereplicationintheMeselson-Stahlexperiment..Meselson－S

6、tahl实验的改进之一对15N-DNA、14N-DNA杂交分子经加热变性，对于变性前后的DNA分别进行CsCl密度梯度离心。结果变性前的杂交分子为一条中间密度带，变性后则分为两条区带，即重密度带（15N-DNA）和低密度带（14N-DNA）。第0代只有15N，第一代出现杂合分子，两代后出现等量的14N和14N-15N杂合分子。纯粹15N的分子没有的了，说明老链保留到了新链中了。3.SemiconservativeReplicationinEukaryotesTaylor-Woods-Hughesexperiments：1957,rootti

7、psofViciafaba（蚕豆）Radioisotope3HlabeledthymidineAutoradiography（放射自显影）蚕豆病是葡糖六磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏者进食蚕豆后发生的急性溶血性贫血。蚕豆(viciafaba)又名胡豆黄TelophaseResultsSemi-conservativereplicationofchromosomescanalsobevisualizedthroughanexaminationofchromosomesthatareallowedtworoundsofreplicationinam

8、ediumcontainingbromodeoxy-uridine.Thesereplicatedchromosomesarethenstainedwithafluorescen