桔全爪螨乙酰胆碱酯酶（AChE）生化特性研究.pdf

《桔全爪螨乙酰胆碱酯酶（AChE）生化特性研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第36卷第1期西华师范大学学报(自然科学版)2015年3月Vo1．36NO．1JournalofChinaWestNormalUniversity(NaturalSciences)Mar．20l5文章编号：1673—5072(2015)01—0012—05桔全爪螨乙酰胆碱酯酶(AChE)生化特性研究何恒果，王进军(1两华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充637009)(2．西南大学植物保护学院，昆虫学及害虫控制工程重庆市重点实验室，重庆400716)摘要：为明确桔全爪螨乙酰胆碱酯酶AChE与其抗药性的关

2、系，应用微量滴度酶标板法对桔全爪螨敏感品系(SS)、甲氰菊酯抗性品系(FeR)和阿维菌素抗性品系(AvR)的乙酰胆碱酯酶(AChE)的生化特性进行了比较研究．结果表明：3个品系中，以甲氰菊酯抗性品系FeR的AChE活力、比活力以及最大反应速率⋯值最大；两抗性品系的AChE活力、比活力和⋯值均显著高于敏感品系(P<0．05)，且两抗性品系之间也存在显著差异(P<0．05)；米氏常数K值在3个品系间无显著差异(P>0．05)．这说明AChE活力提高是桔全爪螨对甲氰菊酯和阿维菌素产生抗性的原凶之一．关键词：桔全爪螨；乙酰胆碱酯酶(AChE)；甲

3、氰菊酯；阿维菌素；抗性中图分类号：$666文献标识码：A桔全爪螨Panonychuscitri(McGregor)，又称柑橘红蜘蛛，属蜘蛛纲蜱螨目叶螨科，是一种世界性的柑橘害螨，除危害柑橘外，还危害梨、苹果、花椒、苦楝、桂花等多种经济作物和观赏植物．由于螨体小、世代多、繁殖速度快、发育历期短等特点，极易对药剂产生抗性．当前，化学防治仍是控制其为害的重要手段之一．但由于不合理用药，桔全爪螨已对许多杀螨剂产生了抗药性～．乙酰胆碱酯酶，AChE(Acetylcho1inesterase，AChE；EC3．1．1．7)是生物神经传导中一种关键性酶

4、，能够迅速水解兴奋性神经递质一乙酰胆碱(ATC)而使神经突触传导正常进行．AChE的主要作用是催化昆虫(螨)中枢神经系统中胆碱突触中的神经传导物乙酰胆碱的水解，为有机磷类和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标’．在正常情况下，昆虫(螨)神经冲动传导到神经末梢后，立即释放乙酰胆碱，从而引起后突触膜电位的改变，因而效应器官后突触产生兴奋，释放在突触间隙的乙酰胆碱会立即被神经细胞表面的AChE所分解，这样，神经传导会继续进行；如果AChE的活性被有机磷杀虫(螨)剂所抑制，释放在突触间隙的乙酰胆碱则不能被分解，这时昆虫(螨)就会出现中毒症状甚至死亡’．

5、所以，AChE对这些杀虫(螨)剂的敏感性高低与昆虫(螨)对有机磷等杀虫(螨)剂的抗性有着密切的关系．在抗性昆虫(螨)中，AChE活性降低或上升，降低是由于发生了基因突变所致，而升高是其本身未发生改变而只是活性增强．为了明确桔全爪螨抗性的产生与体内AChE的关系，本实验通过微量滴度酶标板法，对桔全爪螨不同品系体内AChE活性及动力学常数进行了比较研究．研究结果为进一步丰富叶螨AChE的研究内容，并为桔全爪螨的综合防治及其抗性治理提供一定的理论指导．1材料与方法1．1供试螨供试桔全爪螨采白重庆中国农科院柑桔研究所种质资源圃的枳壳苗上(该苗圃至

6、少10年未用药)，带收稿日期：2014—11—04基金项目：公益性行业(农业)科研专项经费项目(201103020)；四川省教育厅项目(11ZA293)；西华师范大学博士启动基金(10B029)作者简介：何恒果(1978一)，女，四川宜宾人，西华师范大学生命科学学院副教授，博士，主要从事农林害虫综合治理-第36卷第1期何恒果，等：桔全爪螨乙酰胆碱酯酶(AChE)生化特性研究13回室内后移接到盆栽枳壳苗上，在温度为264-1oC，RH为70—75％左右的人工气候室内饲养．种群数量足够后将这一种群分为3。个亚种群，其中一个亚种群不用药，视作敏

7、感品系(ss)；另两个亚种群分别用92％甲氰菊酯和93％阿维菌素原药定期用药处理．其中甲氰菊酯抗性品系(FeR)经19代中不连续汰选16次获得，阿维菌素抗性品系(AvR)19代中不连续汰选11次获得．1．2主要试剂及仪器主要试剂：磷酸氢二钠(Na：HPO)、磷酸二氢钠(NaH：PO)、碳酸氢钠(NaHCO，)、考马斯亮蓝G-250(上海化学试剂公司)、牛血清白蛋白(上海伯奥生物科技有限公司)、碘化硫代乙酰胆碱(ATChI，美国Fluka公司)、5，5一二硫双硝基苯甲酸(DTNB，美国Fluka公司)、99％毒扁豆碱(美国Sigma公司)、

8、92％甲氰菊酯Fenpropathrin、93％阿维菌素Avermectin原药(成都生物药检所)．主要仪器：酶标仪(奥地利TECAN公司)、Mikro22R型高速冰冻离心机(WhatmanB