贵阳地区猪弓形虫病的血清学检测方法分析.pdf

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1、E臣蜀囝5年___ll____⋯w、n_贵阳地区猪弓形虫病的血清学检测方法分析吴玛彤肖芳萍谢丽丽(贵州省畜牧兽医研究所，贵州贵阳550005)摘要：为全面了解贵阳市地区猪弓形虫感染情况，于2Ol4年4照位置，每孔加稀释液75l。月~2015年5月分别采集贵阳地区猪血清样本共984份。采用弓形1．4．3加待检血清虫间接血凝试验(IHA)和弓形虫IgG抗体ELISA两种方法来检测。加入被检血清、阳性对照血清、阴性对照血清，第1孔加入相结果显示，两种方法存在关联性，前者阳性率为i7．37％，后者应血清25l。阳性率为

2、20．73％。表明贵阳地区不同类别的养猪场户存在弓形1．4．4稀释虫病感染，此外，ELISA方法检测弓形虫抗体检出率高于间接血定性检测将与稀释液混匀后的待检血清移液器从第1孑L吸取凝试验。251到第2孔，混匀后再吸取25l到第3孔，混匀后吸取25l丢关键词：猪；弓形虫；血清学调查弃；定量检测阴、阳性和对照血清均稀释到第7：fL。余孔为稀释液对照。弓形虫又称弓形体病，病原是刚地弓形虫，是一种可寄生于1．4．5加诊断液人和多种动物体内的人畜共患病，常为地方性流行，感染率很高将抗原摇匀，每孔加25l，置于振荡器上振荡

3、2min后取[1-2]下，盖上与反应板大小相近的有机玻璃板，置37℃恒温箱2h后。该病近年来在猪场广泛流行，对我国猪的危害最大，感染死亡率高达60～80％，给生猪和畜牧兽医工作人员带来潜在威判定结果。胁。为此，开展对弓形虫病的调查具有重要的公共卫生意义。1．4．6结果判定为全面掌握贵阳地区猪弓形虫的感染情况及流行趋势，对贵阳地在阳性对照血清效价不低于1：1024(第5孔)；阴性对照血区部分规模养殖场及散养户随机采集猪血清样本984份，采用IHA清除第1孔允许有前滞现象“+”外，各孔均为“一”；稀释液对方法和弓形

4、虫IgG抗体ELIsA两种方法对猪血清样品进行了弓形虫照为“一”的前提下，对被检血清进行判定。待检血清效价达到抗体检测。或超过1：64(第3孔)为阳性。“++”为阳性终点。1材料与方法1．4．7弓形虫ELISA试剂盒检测法1．1仪器在反应板孔内加入稀释液稀释好的被检血清，阳性血清，阴96孔110。V形有机玻璃反应板，移液器(10l、501、性血清各0．2ml，置湿盒内于37"12温箱感作2h，甩去血清，洗涤五200l_Ll、10001)；DT5—1B离心机，THZ一98A型恒温震荡器，次拍干后，加入稀释好的酶标

5、记物0．2ml置于37℃温箱感作2h，弃BioTek—ELx800酶标仪等等。去液体洗涤次后拍干加显色剂和各振荡混匀避光反应后加入终止1．2检测试剂液振荡充分混匀，用酶标仪测定其在波长490nm下的OD值，操作抗原，批号：20131230；稀释液，批号：20140105；阳性、步骤按猪弓形虫抗体检测试剂盒法(ELISA)说明进行。阴性对照血清，批号：20131230；均购自中国农业科学院兰州兽1．4．8结果判定医研究所；弓形虫ELISA诊断试剂盒，购自中国农业科学院兰州样本D490nm值≥标准阴性血清OD值二倍

6、以上判定为弓形虫兽医研究所；其阳性、阴性血清批号为：140305；抗原、稀释液抗体(ToxoplasmaIgG，以下简称TOX—IgG)阳性；批号为：140105。2结果1．3样品结果见表1。贵阳地区抽查的984份猪血清，经弓形虫间接血984份猪血清，采自贵阳地区3县1市6区的16个规模场和77个凝试验和弓形虫IgG抗体ELISAN种方法检测，总体阳性率分别为散养户。17．37％和20．73％，两者之间无显著性差异(P>0．05)。1．4间接血凝试验3讨论1．4．1诊断液的处理(1)该调查结果表明，贵阳市地区猪

7、有不同程度弓形虫感将冻干抗原按说明书要求~D5ml灭菌纯水稀释摇匀，2000r／染，猪弓形虫病阳性率与场户养殖类别有一定关联性，两种血清min离心5rain，弃上清液，加等量稀释液摇匀，置4℃冰箱静置学方法检测结果表明，散养户阳性率分别为20．42％、23．47％，高24h后使用。于规模养殖场阳性率12．15％和16．02％，可能与养殖方式、环境等1．4．2加稀释液因素有关。在反应板上标记阳性血清、阴性血清、空白对照和稀释液对(2)弓形虫间接血凝和弓形虫IgG抗体ELISA方法平行检测表1贵阳市地区2014~2

8、015年抽查猪弓形虫检测结果基金项目：省级农业科技示范园区项目(筑科合同[：D131o211_2．2号)。作者简介：吴玛彤(1989一)，女，大学本科，研究实习员。54c忽c蠢i

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12、l5；5盛新城疫抗体水平检测与分析华学峰(安徽繁昌县繁阳镇畜牧兽医站，安徽繁昌241200)摘要：新城疫是一种发病率和死亡率都很高的禽类传染病，严1．2方法重威胁养禽业的健康发展。本文采用血凝和血凝抑制