土壤中微生物的分离与纯化.docx

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1、微生物学实验报告实验名称：土壤中微生物的分离与纯化课程名称环境微生物学实验学院环境科学与工程学院专业班级2011级环境科学（1）班学号姓名刘迪鸿联系方式2013年12月10日实验报告土壤中微生物的分离与纯化刘迪鸿（广东工业大学11级环科（1）班）摘要：各种微生物生长所需条件存在差异，根据需要配制不同的培养基可以得到只含目标菌株的纯培养。关键词：选择培养基，分离，纯化一、实验目的与要求1.明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。2.掌握根据需要选取不同的环境

2、以找到目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术，掌握微生物培养方法以及接种方法。二、实验方案1.实验原理培养基是人工的将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物，因此，培养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源，氮源，能源，无机盐，生长因素。）和水，根据微生物的种类和实验目的地不同，培养基也有不同的种类和配置。在土壤，水，空气及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一

3、种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分理它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养，酸碱度，氧等条件的要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离纯化微生物，直至得到纯菌株。2.实验材料1)培养基与试剂牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏2.0g，蛋白胨4.0g，氢氧化钠2.0

4、g，琼脂6~8g，水400mL。高氏一号培养基配方：可溶性淀粉4g，硝酸钾0.4g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸亚铁0.004g，琼脂6~8g，水400mL。马铃薯蔗糖培养基配方：马铃薯80g，蔗糖8g，琼脂6~8g，水400mL。马铃薯葡萄糖培养基配方：马铃薯80g，葡萄糖8g，琼脂6~8g，水400mL。1)仪器以及其他用品高压灭菌彩。高压灭菌锅，超净工作台，培养皿，移液器，250毫升锥形瓶250毫升烧杯。均玻璃珠，接种环，就金丹，显微镜，称量纸等。1.实验方法1)

5、实验流程图培养基的制备灭菌微生物的分离土壤取样2)实验步骤A.土壤取样广工正门对面山坡，即取即用。B.培养基的配制C.灭菌将配制好的培养基，用报纸包扎好的培养皿，用橡胶塞封好的盛有9mL无菌水的试管，枪头盒装有45mL蒸馏水与玻璃珠的锥形瓶，玻璃珠放到高压灭菌锅进行高温蒸汽灭菌。D.微生物的分离a)倒平板将牛肉膏蛋白胨培养基，高氏一号琼脂培养基，马铃薯蔗糖琼脂培养基，马铃薯葡萄糖琼脂培养基融化。待冷却至55℃至60℃时，在高氏一号培养基中加入1mL的0.5%重铬酸钾，在马铃薯蔗糖培养基中加入1mL

6、的1%的链霉素，然后分别倒平板。a)制备土壤稀释液称取土样5g，放入盛有45mL无菌水并带有玻璃珠的烧瓶中。震荡摇晃约二十分钟，使土样与水充分混合，将菌分散，配制成10-1土壤溶液，用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀，然后再用一支无菌吸管从此试管中吸取1mL土壤悬液注入另一盛有9mL无菌水的试管中，以此类推制成10-2，10-3，10-4,10-5,10-6各种稀释度的土壤溶液。b)分离微生物操作步骤：u分离细菌i.涂布将牛肉膏蛋白胨两个平板底面

7、分别用记号笔写上10-5和10-6两种稀释度，然后用两支1mL无菌吸管分别由10-5和10-6两管土壤稀释液中各吸取200uL对号放入已写好稀释度的平板中，加入八个灭菌的玻璃珠轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻璃珠倒出。ii.培养倒置于37℃温室中培养1~2天u分离放线菌i.涂布将高氏一号两个平板底面分别用记号笔写上10-3和10-4两种稀释度，然后用两支1mL无菌吸管分别由10-35和10-4两管土壤稀释液中各吸取200uL对号放入已写好稀释度的平板中，加入八个灭菌的玻璃珠轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻

8、璃珠倒出。ii.培养倒置于37℃温室中培养3~5天u分离酵母菌与霉菌(如图1)i.涂布各取两个葡萄糖与蔗糖平板底面各自用记号笔写上葡10-4、葡10-5和蔗10-4和蔗10-5两种稀释度，然后用1mL无菌吸管分别由10-4和10-5两管土壤稀释液中各吸取200uL对号放入已写好稀释度的平板中，加入八个灭菌的玻璃珠轻轻晃动，涂布均匀，然后将玻璃珠倒出。ii.培养倒置于37℃温室中培养3~5天A.挑菌划线分离使用接种环从待纯化的菌落中蘸取少量菌种，细菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上面，霉菌