多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价.pdf

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1、中国水产科学2011年7月，18(4)：918—923JoumalofFisherySciencesofChina研究论文DoI：10．3724／SP．J．1118．2011．00918多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价王秀华，周凌云2，王玉娟，刘琴21．中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071；2．华东理工大学，上海200237摘要：采用注射与浸泡2种方法，对构建的多效价载体疫苗MVAV6203A．1进行了免疫保护效果和血清效价的研究。结果显示，用多效价载体疫苗注射免疫大菱鲆(Scophthalmusmaximus)，可同时获得对鳗弧

2、菌(Vibrioanguil—larum)和嗜水气单胞菌eromonashydrophila)的免疫保护效果，免疫相对保护率分别为80．6％和77．0％；用ELISA方法测定血清效价的结果显示，免疫MVAV6203A．1后大菱鲆血清效价最高达到2048，均值为891，明显高于对照组的97；用多效价载体疫苗浸泡免疫大菱鲆后，对鳗弧菌与嗜水气单胞菌的免疫相对保护率分别为62．2％和11．7％。血清效价分析显示，实验组与对照组的均值均为64。上述结果表明，所构建的疫苗MVAV6203A．1可有效提高大菱鲆对鳗弧菌和嗜水气单胞菌的免疫力，并且免疫和攻毒的

3、途径可能是影响免疫保护效果的因子。本研究旨在为鳗弧菌与嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。关键词：多效价载体疫苗；大菱鲆；鳗弧菌；嗜水气单胞菌；免疫保护率；抗体效价中图分类号：$96文献标志码：A文章编号：1005—8737一(2011)04—0918—06细菌性疾病已成为危害水产养殖动物的主要价等方面进行了评价分析。病因L1J，在所报道的鱼类病原菌中，鳗弧菌I材料与方法(Vibrioanguillarum)与嗜水气单胞菌eromonashydrophila)是危害养殖鱼类较重的2种病原，该I．I材料病原菌能够感染淡水及海水鱼类，并且在世

4、界范1．I．I实验材料与饲育实验用鱼为养殖大菱鲆，围内流行[2-5]o为防治鱼类细菌病，许多国家已进体长为8．99～9．72cm，购于海阳市黄海水产有限行了鱼类细菌疫苗产品的开发L6]，并已取得了显公司。养殖用水为地下海水与淡水勾兑，盐度28，著的效果L7J。中国鱼类疫苗产业起步晚，从1993恒温17．5℃，pH8．0。实验鱼经暂养10d后用于实年至今，仅有3个鱼类疫苗获得渔药许可，而正验，免疫后流水养殖，日投喂配合饵料2次，日投式推广使用的国产商品化鱼用疫苗尚为空白。饵量占体质量的1．5％。针对鳗弧菌与嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病，1．I．2疫苗

5、及毒株按照Zhou】的方法分别制备Zhou等J利用减毒的鳗弧菌为疫苗载体，将嗜水疫苗鳗弧菌减毒株MVAV6203(空载体)疫苗和多气单胞菌甘油醛．3．磷酸脱氢酶(GAPDH)基因导效价载体疫苗MVAV6203A一1。攻毒用菌株，为鳗入疫苗载体中，构建了抗鳗弧菌与嗜水气单胞菌弧菌MVM425和嗜水气单胞菌菌株LSA34。的多效价载体疫苗，为评价该载体疫苗的免疫效1．1．3抗大菱鲆IgM抗体抗大菱鲆IgM单克隆果，本研究从注射和浸泡免疫保护效果及血清效抗体(Productno：F08)购于英国AquaticDiagnostic收稿日期：2010—07

6、—08；修订日期：2010—11-22．基金项目：国家“863”计划项目(2006AA1o0310)；国家科技支撑计划项目(2o06BAD03B0504)；山东省科技攻关计划项目(2o06GG22O5o05)；基本科研业务费专项资金资助项目(2007一GY-03)．作者简介：王秀华(1969一)，男，副研究员，主要从事水产养殖动物病害控制及免疫学研究．E-mail：wangxh@ysfi．ac．ca第4期王秀华等：多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价919Ltd。HRP标记的羊抗鼠IgG(Lot61l7)购于天根入100LMVM425细菌悬液(浓度1

7、．3×10生化科技(北京)有限公司。cell／mL)4℃过夜；再向每孔加入0．05％(v／v)戊二1．2方法醛PBS溶液50gL／well，22cI=放置20min，之后低1．2．1免疫方法疫苗免疫实验在山东潍坊实验盐洗液洗板3次，用250laL1％(w／v)的BSA封闭，点进行，养殖用水族箱为直径1．0m的圆形玻璃22℃过夜，次日低盐洗液洗板3次；再分别向每钢桶(有效水体0．5m。)。免疫分组及免疫剂量见表孔中加人100gL不同稀释倍数的鱼血清与空白1。注射免疫组分别使用了MVAV6203A一1、对照PBS，每个稀释度作2个平行，22℃放置3h

8、MVAV6203和生理盐水，后二者作为对照；浸泡后高盐洗液洗板5次；然后每孔加人1O0gL再生组使用了MVAV6203A一1、MVAV6