玉米抗草甘膦突变体筛选的研究.doc

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1、玉米抗草甘膦突变体筛选的研究　　摘要：以玉米杂交组合ＨｉＩＩＡ×昌７－２和自交系“６３０８”为材料，采用体细胞筛选法进行抗草甘膦突变体的筛选，体细胞筛选采用了直接筛选和梯度筛选两种方式。结果表明，草甘膦最高筛选压力为０．５ｍＬ／Ｌ，梯度筛选更有利于愈伤组织的存活和幼苗分化，同一筛选条件下，杂交组合ＨｉＩＩＡ×昌７－２的分化时间明显短于自交系“６３０８”，缓苗成活率和移栽苗成活率明显高于自交系“６３０８”。最终筛选得到在细胞水平上能抗０．５ｍＬ／Ｌ草甘膦、植株水平上抗０．９ｍＬ／Ｌ草甘膦的突变体。　　关键词：玉米

2、；草甘膦抗性；突变体；体细胞筛选　　中图分类号：Ｓ５１３；ＴＱ４５７．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11405－0901-04　　　　ＳｔｕｄｙｏｎＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＧｌｙｐｈｏｓａｔｅRｅｓｉｓｔａｎｔＭｕｔａｎｔｓｉｎＭａｉｚｅ　　　　ＺＨＡＯＪｉｎ－ｈｕｉ１，ＨＵＹａｎ－ｍｉｎ２　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＨｙｂｒｉｄcombinationＨｉＩＩＡ×Ｃｈａｎｇ７－２ａｎｄｉｎｂｒｅｄｌｉｎｅ“６３０８”ｗｅｒｅｃｈｏｓｅｎｔｏｓｅｌｅｃｔｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｓ

3、ｉｎｍａｉｚｅｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｓｏｍａｔｉｃｓｃｒｅｅｎｉｎｇｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｓｕｃｈａｓｄｉｒｅｃｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｇｒａｄｉｅｎｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇｗｅｒｅａｄｏｐｔｅｄｉｎｓｏｍａｔｉｃｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｕｐｍｏｓｔｓｅｌｅｃｔｉｏｎｐｒｅｓｓｕｒｅｏｆｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｗａｓ０．５ｍＬ／Ｌ．Ｇｒａｄｉｅｎｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇｗａｓｂｅ

4、ｔｔｅｒｆｏｒｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｃａｌｌｉａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｙｏｕｎｇｐｌａｎｔｓ．CombinationhｙｂｒｉｄＨｉＩＩＡ×Ｃｈａｎｇ７－２ｈａｄｏｂｖｉｏｕｓｓｈｏｒｔｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｈｉｇｈｅｒｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｎｏｔｏｎｌｙｉｎｔｈｅｎｕｔｒｉｔｉｏｎｐｏｔｂｕｔａｌｓｏｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｔｈａｎｉｎｂｒｅｄｌｉｎｅ“６３０８”ｕｎｄｅｒｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ａｓａｒｅｓｕｌｔ，ｔｈｅｍｕｔａｎｔｓｗ

5、ｈｉｃｈｃｏｕｌｄｒｅｓｉｓｔ０．５ｍＬ／Ｌｇｌｙｐｈｏｓａｔｅａｔｃｅｌｌｌｅｖｅｌａｎｄ０．９ｍＬ／Ｌｇｌｙｐｈｏｓａｔｅａｔｐｌａｎｔｌｅｖｅｌｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｉｚｅ；ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ｍｕｔａｎｔ；ｓｏｍａｔｉｃｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　　　　杂草严重影响作物的产量和品质，应用除草剂除草虽然具有高效、省工、增产等优点，但除草剂对作物和杂草生长发育的影响是共同的，因此，除草剂在除草的同时也损伤了作物，这就需要选育抗除草剂的作物品种和开发新型除草剂，而选

6、育一个抗除草剂的作物新品种的费用只占开发一个新型除草剂费用的１％～５％［１］，所以选育抗除草剂作物品种是一条防除杂草经济有效的途径。草甘膦是一种广泛应用的高效低毒芽后灭生性除草剂，筛选抗草甘膦突变体及选育抗草甘膦品系具有重要的意义。国外早在２０世纪８０年代就通过转基因方法成功培育了一系列抗草甘膦作物［２，３］，转基因抗草甘膦玉米也于１９９７年开始在美国种植［４］，而国内关于抗草甘膦玉米的研究鲜有报道［５，６］，迄今，中国还未得到任何有田间实用水平的抗草甘膦玉米。本试验以玉米自交系“６３０８”和杂交组合ＨｉＩＩＡ

7、×昌７－２为材料，室内采用体细胞筛选法进行玉米抗草甘膦突变体的筛选，田间通过喷施有效除草浓度的草甘膦筛选抗性植株。抗草甘膦玉米的筛选成功，不仅可以为常规育种提供新的种质资源，而且可以为抗草甘膦作物的基因构建准备材料，还能为其他植物抗除草剂突变体的选育提供参考。　　１材料与方法　　１．１试验材料　　供试玉米材料为自交系“６３０８”和杂交组合ＨｉＩＩＡ×昌７－２，草甘膦是浙江菱化集团生产的１０％水剂。①诱导与继代培养基：Ｎ６基本培养基＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋２ｍｇ／Ｌ２，４－二氯苯氧乙酸＋５００ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋５００ｍｇ

8、／Ｌ酸水解酪蛋白＋７．２ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ值为５．８～６．０；②筛选培养基：继代培养基＋草甘膦；③分化培养基：ＭＳ基本培养基＋０．８ｍｇ／Ｌ激动素＋１．０ｍｇ／Ｌ６－苄基腺嘌呤＋５００ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋５００ｍｇ／Ｌ酸水解酪蛋白＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋７．２ｇ／Ｌ琼脂；④生根与壮苗培养基：１／２ＭＳ大量元素＋改良ＭＳ微量元素及有机成分＋１．２ｍｇ／Ｌα－萘乙酸＋５００ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋５００ｍｇ／