实验一 光合细菌的培育.ppt

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1、实验一光合细菌的培养一、实验目的：通过本实验，了解并掌握光合细菌的培养方法。二、实验仪器设备：光和细菌的培养设备：包括灭菌设备、培养容器、培养用具和检测仪器。1.灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅，用于高压湿热灭菌。2、培养容器(1)试管：φ15mm×L160mm(中型试管)。主要用于液体培养和斜面培养。φ20mm×L180mm(大型试管)。主要用于制平板深层试管或盛无菌水等。(2)培养皿：φ6～10cm(常用φ9cm).用于制作平板培养基，以分离菌种和观察菌落形态。(3)移液管：容量1～10ml(常用1ml、5ml、10ml)，制备培养基、稀释液

2、体、吸取样品等使用。(4)锥形瓶(有、无具塞磨口两种)：30～500ml。用于各种光和细菌单体或组合连续培养的逐级扩大培养用。(5)三角烧瓶：500～5000ml，用于扩大培养。(6)细口瓶：5000～20000ml，用于扩大培养和生产性大量培养。(7)塑料薄膜袋：用于生产性大量培养。(8)大型塑料水槽：一般为圆柱形。容量为300～500L，用于生产性大量培养。3、培养用具(1)操净工作台：用于菌种的分离和接种。(2)恒温培养箱（或人工气候箱，光照培养箱）：主要用于培养菌种和小型培养使用。箱内必须带有钨丝灯泡的人工光源。(3)电冰箱和冷藏

3、冰柜：主要用于菌种和某些有机试剂的保存以及光和细菌母菌种液的长期保存(5-10)℃。(4)接种环：用于菌种取样、接种。(5)电动离心机：用于液体菌种浓缩和采收。(6)空压机：用于微气方式培养。(7)电风扇和排气风扇：用于培养时控温、调稳。(8)分析天平：用于试验产品烘干后的称重及分析称样等。(9）此外，应还有分液漏斗、载波片、盖玻片、酒精灯及电光源(碘钨灯、白炽灯泡等)设施及其支架、控温设备和充气设备。三、实验内容：1.光和细菌培养基的制备2.光合细菌菌种的分离3.菌种的培养4.菌种的保存5.光和细菌的大量培养6.光合细菌的培养技术和保种

4、技术。四、实验步骤与方法：（一）光和细菌培养基的制备Sawad培养基(1975)：用于单菌落分离和荚膜红假单孢菌的培养。1.微量金属元素(T.m.)贮液培方EDTA2.5gZnSO4·7H2O10.95gMgSO4·H2O1.54gCuSO4·5H2O0.39gCoCl2·6H2O0.2gFeSO4·7H2O7.0g蒸馏水1000ml2.生长素贮液培方：生物素1mg烟酸(尼克酸)0.1mg对氨基苯甲酸10mg维生素B1100mg蒸馏水1000ml。酵母膏和生长素贮液二者有一即可(即：有了酵母膏就不必加生长素)。（二）光合细菌菌种的分离培养

5、光和细菌，首先要有菌种，菌种可以从别的单位获得。如果别的单位没有适合的菌种，就要从自然生态环境中分离。分离菌种的工作要求虽然比较高，但也并非高不可攀，只要按照要求操作，就能分离出需要的菌种。1.采样要根据光和细菌的生态特点，选择光和细菌大量分布的地方采样。目前，水产养殖业使用的光和细菌，主要是红螺菌科的一些种类。这些光和细菌是以有机质作为光和细菌的碳源和供氢体，故广泛分布在被有机质污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水池塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业等废水排水沟处呈橙黄色或分红色的泥土中。光和细菌在污水池塘等有机质含量丰

6、富的地方，分布数量更大。在以上所述地方都可以采集样品。采样工具有杯、采水器和采泥器，浅水处直接用杯舀取少量样品，深水处借用采水器和采泥器采样，采集到的底泥连同水一起放入广口瓶中带回。2.富集培养采集的样品中光和细菌的数量一般较少，并且含有不少杂菌，难以直接进行分离，必须进行富集培养。所谓富集培养，就是为要分离的光和细菌提供适宜的培养基与培养条件，使其大量增殖。同时抑制杂菌的生长。富集培养除了培养基以外，还要给培养物制造缺氧的培养环境。为此，先将采回的样品(泥土或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，再倒入预先配制好的液体培养基，

7、充分搅拌，使样品与培养基充分分散混合，然后在玻璃圆筒或大型试管中加入液体石蜡，以完全隔绝空气，防止空气中的氧气溶解于培养基中（图1，a）。光和细菌的富集培养法a.玻璃圆筒富集培养法b.具塞磨口玻璃瓶富集培养法1.液体石蜡2.橡皮圈3.塑料布如果用具塞的磨口瓶，则要加满培养液，盖上瓶塞，让多余的培养液总瓶口溢出，瓶内不能有气泡存在。瓶口套上塑料薄膜，用橡皮筋扎以减少水分蒸发（图1，b）。为了加快光和细菌的增殖，除了缺氧的环境条件以外，适宜的温度和光照度也很重要。培养温度一般为25～30℃，光照强度为5000～10000lx，最好一天24h连

8、续光照，经过2～6周的富集培养，在培养容器的内壁逐渐出现光和细菌菌落，或整个培养液长成红色。一般地说，海水光和细菌比淡水光和细菌生长缓慢，故富集培养的时间更长。如果富集培养初步获得成功，就用吸