补中益气汤对雏鸡免疫功能的影响.pdf

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1、扩大被广泛用于内、外、妇、儿各科，对它的研究中牧股份南京药械厂产品。新城疫检测抗原，自试重点也从消化系统逐渐扩展到免疫学科等多方制。验面。许多国内外学者结合临床化验指标，对其免1-3主要试剂研疫药理作用进行了大量的实验研究，证明其能够Alsever’s血球保存液配制准确称取葡萄糖究增强机体免疫力，并对动物机体的细胞免疫、体2．05g、柠檬酸钠0．80g、氯化钠0．42g，溶解于液免疫都有促进作用，是治疗免疫功能低下的有800mL双蒸水中，以0．1％柠檬酸溶液调节pH效方剂【l】。雏鸡的免疫功能尚不成熟，然而根据疾为7．2，然后定容至1000mL。用0．22

2、m滤膜过病的流行特点，许多疫病的防控，如鸡新城疫、传滤，再以108℃高压蒸汽灭菌15min，4oC保存。染性支气管炎、传染性法氏囊病等烈性病毒性疾ConA、RPMI1640培养液、Hank’s液、磷酸盐病的免疫必须在早期进行。因此提高雏鸡的免疫缓冲液和四甲基偶氮唑蓝(M，I．I1)溶液的配制分功能、增强机体免疫应答是临床亟待解决的切实别同第六章1．2。淋巴细胞分离液，上海恒信化学问题。为此，本研究首先给健康雏鸡饲喂补中益试剂有限公司产品，批号20001220。裂解液，二气汤，给药7天后用新城疫疫苗(Ⅳ系)免疫，测甲亚砜(DMSO)，分析纯，苏州正兴化工研究

3、院产定抗体和T淋巴细胞增殖的动态变化，旨在确定品。补中益气汤对雏鸡的增强免疫效果，为该药的临1．4鸡红细胞悬液制备床应用提供理论依据。采集鸡外周血5mL，转移到20mLAlsever’s1材料与方法血球保存液中，4℃保存(保存时间不超过一1．1试验药物周)。临用前，以生理盐水洗涤3次，每次洗涤后收稿日期：2011-08-08以2000r／min离心5min。最后用生理盐水调节作者简介：卢宇(1978一)男，江苏睢宁人，博士，助理红细胞悬液浓度为0．5％。研究员，从事兽用生物制品工程技术的研究。E—mail：1．5主要仪器fishmanluyuC~ahoo．

4、corn．en；DG一3022型酶联免疫检测仪，国营华东电子项目基金：国家公益性行业(农业)科研专项管厂产品；CO培养箱，美国Revco公司生产；(20080320)，江苏省农业科技自主创新资金CX(09)104中兽透露走XSZ—I)：型倒显微镜，重庆光学仪器厂生产；量振荡器r_搬荡混匀后置于温箱中感作20min。ff75—2A型微贳振荡器，上海医用分析仪器厂生取出向每孔加入50L0．5％鸡红细胞悬液，同ll产；96孔细胞培养板、24孑L细胞培养板和96孔时设阳性清、阴性血清及空白对照孑L。振荡混ll微量m凝板，德国Nunclon公司生产。匀后置于37‘温

5、箱中感作30min，待对照孔红ll1．6动物分组与处理细胞已经沉淀时观察结果。II1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡150羽(购自结果判定，以l00％抑制凝集的血清最大稀lI汤泉农垦种鸡场)随机分为5组。分为补中益气释度为该血清的抗体滴度，每组以l0只鸡血清lI汤的高、中、低剂量组(2．0mL／羽·天、1．0mL／羽·抗体滴度的、平均值表示该组的抗体水平。II天和0．5mL／羽·天)，生理盐水对照组和空白非1．8淋巴细胞增殖测定ll免疫对照组。连续饮水给药7天，7日龄滴鼻、点采用M1Tr法【3I。将抗凝血样用Hank’s液稀II眼免疫ND—IV(1羽份，羽)，空白

6、非免疫对照组释l倍，小心加在淋巴细胞分离液上层，2000Il隔离饲养。分别于免疫后第7d(D，)、14d(D)、r／min离心20rain，吸取中间云雾状白细胞层，用ll21d(D2)和28d(D绉)每组随机抽取10羽翼下静无血清RPMIl640营养液洗涤2次，1500r／rainII脉采“lL，分离血清，用13一微量法检测ND—HI抗离心15min。台盼蓝染色，细胞计数活细胞大于II体效价；同时，每组随机抽取4羽，心脏采JilL(4．090％后，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为IimL／羽)，肝素抗凝，测定外周血T淋巴细胞增2．5×106个·mIJ

7、--，加入到96孑L细胞培养板中，8oII殖。I_／孔，每孑L再加20LConA，每个样品重复4lI1．7鸡血清新城疫抗体效价检测【2]孔，然后置于39．5℃、5％CO条件下培养44h，II1．7．14单位抗原的滴定在96孔微量血凝板取出每孑L加入MTT20L，继续培养4h后，每Il上，从左到右每孔各加50LPBS液，另加一排孔加裂解液100IxL，将细胞板置于微量震荡器EN,N5mi使沉淀完全溶解，在酶联免疫仪上_作为重复。再向每排的第l孔加入50L新城_疫尿囊液，依次向后倍比稀释直至第1l孑L，第检测570nm处的吸光值(A)，作为T淋巴细胞试l2孑L

8、作为对照，无抗原液；然后向每孔加入50增殖的指标。验L0．5％鸡红