血清alt标准曲线法课件

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1、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定掌握ALT活性测定的基本原理;熟悉分光光度计的使用方法;了解ALT活性测定的临床意义;学习excel制作标准曲线的方法。【目的要求】1.器材试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计、比色杯、记号笔。2.试剂(1)新鲜血清(2)底物液(3)2,4-二硝基苯肼(4)丙酮酸标准液(5)NaOH溶液(6)磷酸盐缓冲溶液【器材和试剂】分光光度法是以朗伯—比尔定律为基础，建立起来的分析方法。【实验原理】It/I0比值称为透光率T，通常用百分数表示有色溶液吸收光的程度称为吸光度，用A表示。T=It/IoA=-logT

2、=-log(It/Io)朗伯-比尔定律：当一束单色光通过有色溶液时，吸光度A与溶液的浓度C和溶液的厚度L的乘积成正比关系A=KCL式中K为一常数，其大小随溶液的性质和入射光的波长而定【实验原理】朗伯-比尔定律应用A标准=KC标准LA测定=KC测定L标准品法测定未知样品含量C测定=A测定A标准×C标准朗伯-比尔定律应用标准曲线法测定未知样品含量用标准品配制成不同浓度的标准溶液，测其相应的吸光度值，以标准品的浓度作为X坐标，以吸光度值为Y坐标，绘制标准曲线（通常为直线）。可用未知样品的吸光度在标准曲线上查找出相应的浓度。吸光度浓度朗伯-比尔定律应用Excel制作标准曲线测定未知

3、样品含量用标准品配制成不同浓度的标准溶液，测其相应的吸光度值，用excel制作标准曲线，并用待测浓度的溶液吸光度在标准曲线上求得相应的浓度数值。谷丙转氨酶ALT【实验原理】取试管6支，按下表加入试剂：【实验操作】丙酮酸标准液的制备和样品测定加入物(mL)空白管标准1标准2标准3标准4标准5测定管标准品00.050.10.150.20.25丙氨酸氨基转移酶基质液0.50.450.40.350.30.250.50.1mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.4)0.10.10.10.10.10.1待测血清0.1置３７℃水浴中保温３０分钟２,４－二硝基苯肼溶液0.50.50.50.50.

4、50.50.5置３７℃水浴中保温２０分钟0.4mol/LNaOH溶液5555555混匀，静置１０分钟，在波长520nm，以空白管调零，测定吸光度值相当于酶活性浓度（U/L单位）04795162250333A1A2A3A(平均值)丙酮酸标准液的制备和样品测定加入物(mL)空白管标准1标准2标准3标准4标准5测定管校准品00.050.10.150.20.25丙氨酸氨基转移酶基质液0.50.450.40.350.30.250.50.1mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.4)0.10.10.10.10.10.1待测血清0.1置３７℃水浴中保温３０分钟２,４－二硝基苯肼溶液0.50.5

5、0.50.50.50.50.5置３７℃水浴中保温２０分钟0.4mol/LNaOH溶液5555555混匀，静置１０分钟，在波长520nm，以空白管调零，测定吸光度值相当于酶浓度（U/L单位）04795162250333A100.1150.1540.2250.3120.4180.089A200.1170.1590.2320.3180.4180.089A300.1170.1600.2320.3120.40.090A(平均值)00.1160.1570.2300.3170.4190.0891.先作出标准曲线:测出标准溶液的A值及待测溶液的A值,输入excel(B列所示),输入对应的标准

6、溶液浓度,如图1:【如何用excel制作标准曲线】2.选好两列数值,点取”图表向导”按钮(如图1),先在图表类型中选“XY散点图”，并选图表类型的“散点图”（第一个没有连线的），如图2：3.点击“下一步”，出现如下界面。如是输入是如本例纵向列表的就不用更改，如果是横向列表就改选“行”，如图3：4.点击“下一步”，出现图表选项界面，可以选择不显示图例，如图4：5.在图表选项界面，调整选项，添加标题，如图5。6.点击“下一步”，出现完成界面，如图6。7.点击“完成”，一张带标准值的完整散点图完成，如图7：7-1如何使图形变得饱满？7-2如何使图形变得饱满？7-3如何使图形变得饱满

7、？7-4如何使图形变得饱满？7-5如何使图形变得饱满？7-6如何使图形变得饱满？7-7如何使图形变得饱满？8.绘制出标准曲线：先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。如图8：9.本例是线性关系，在类型中选“线性”，如图9：10.点击“确定”，标准曲线画好，如图10：11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值（直线相关系数）前点一下，勾上。如图11：12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12：13.如图输入公式“=31.46*