丹参酚酸B盐对大鼠肝星状细胞收缩以及对细胞骨架的影响-论文.pdf

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1、中华肝脏病杂志2014年4月第22卷第4期ChinJHepatol，April2014，Vo1．22，No．4·281·丹参酚酸B盐对大鼠肝星状细胞收缩以及对细胞骨架的影响徐虹卢超平键周扬徐列明【摘要】目的探讨丹参酚酸B盐(SalB)对内皮素一1(ET-1)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)收缩以及对细胞骨架的影响。方法采用肝脏原位灌流酶消化法、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠HSC。培养细胞分为对照组、ET-I组、SalB组和Y-27632组。ET-1组细胞予以10-8mol／LET-1刺激，SalB

2、组或Y一27632组细胞在ET-1刺激前分别予以10-5mol／LSalB或10-5mol／LY-27632预处理30min。用胶原凝胶收缩法观察HSC收缩情况。用甘油胶电泳和Odyssey荧光成像系统检测肌球蛋白轻链2(MLC2)的磷酸化水平。用FITC-鬼笔环肽特异性染肌动蛋白丝，观察SalB对HSC中肌动蛋白骨架的影响。两组间比较用t检验，多组间比较用方差分析，Q检验。结果对照组凝胶面积为76．89％土3．84％，ET-1组凝胶与对照组相比明显收缩，面积为37．10％土5．1O％(口=25．51，P

3、<0．01)。10-mol／LSatB或10-mol／LY一27632预处理能显著抑制HSC收缩，凝胶面积分别为67．01％土4．14％和77．28％±2．0&A，与ET-I组相比，口值分别为16．97、25．76，尸值均<0．0l，差异均有统计学意义。在基础状态下MLC2磷酸化水平为(0．35土0．05)molPO,／molMLC2；ET-1刺激后，MLC2磷酸化水平迅速匕升，在ET-1刺激5min时为(0．87±0．04)melPO4／molMLC2，30min时达到高峰【(0．96士0．04)mol

4、POJmolMLC2】。SalB能显著抑制ET-1诱导的MLC2磷酸化，可使ET-1刺激30rain时MLC2磷酸化水平下降63．1％(口=26．67，尸<0．01)，并且使肌动蛋白丝解聚，细胞骨架松弛。结论SalB能有效抑制ET-1诱导的大鼠HSC收缩。这种效应是基于SalB抑制ET-1诱导的MLC2磷酸化以及抑制HSC中肌动蛋白纤维的聚合。【关键词】肝硬化；收缩；微丝EfectsofsaivianoHcacidBonendothelin-l-inducedcontractionandcytoskele

5、tonorganizationofhepaticsteHatecellsinratsXuHongLuChao,PingJian,Yang,XuLieming．InstituteofLive~Diseases,ShanghaiUniversityoftraditionalChineseMedicine,Shanghai201203,ChinaCorrespona~ngauthor：XuLiemingEmail：m绷啦g(亘“幼扎[Abstract]ObjectiveToinvesfigatetheefect

6、sofsalvianolicacidB(salB、onendothelin-l(ET-l、一inducedcontractionandcytoskeletonreorganizationofrathepaticstellatecells(I-ISCs)．MethodsHSCseoUectedfromSprague-DawleyratsbyinsituperfusionwithpronaseEandisolatedbydensity-gradiantccntfifugafionwithNycodenz．Ce

7、ilsweretreatedwithET-1，withorwithoutSalBorY-27632(aspecificinhibitorofrho-associatedproteinkinases)pretreatrnent．HSCcontractionwasevaluatedbycollagengelcontractionassay．CytoskeletalreorganizationinresponsetoET-1Wasevaluatedbydetectingchangesinphosphorylat

8、ionofmyosinlightchain2(MLC2)usingglycerol-ureaPAGEandtheOdysseyInfraredImagingSystem．ChangesinactinstressfiberpolymerizationweredetectedbyFITC．1abeledphailoidin．Diferencesbetweenthevariouscelltreatmenfprelrealmentgr