TLR4siRNA预处理防治小鼠急性肝损伤-论文.pdf

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1、CHINESEJ．DIAL．&ARTIF．ORGANSVo1．24NO．1MAR．2013TLR4siRNA预处理防治小鼠急性肝损伤徐哲，黄长形，李羽，王平忠，任广立，张岩，刘清泉，连建奇，贾战生，聂青和，孙永涛，白雪帆【摘要】目的急性肝功能衰竭是重要的临床综合征。近年来，对急性肝功能衰竭的治疗进展甚微，如何从根本上解决这一难题依然任重道远。方法本研究基于pSilencer4．1-CMVneosiRNA表达载体，设计并构建了TLR4siRNA表达载体。经体外细胞转染实验，筛选了3条抑制效果较好的表达载体，进一步行体内动物实验。进行

2、酶切及测序鉴定，体外评估其对转染RAW264．7细胞TLR4mRNA、蛋白表达水平的抑制作用，进一步评价了TLR4siRNA对TNF—、MIP一2水平的影响，及对LPS诱导的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的作用；之后再采用3条抑制效率较高的TLR4siRNA进行体内试验，采用尾静脉高压水注射法转染C57Bld6小鼠，静默TLR4的表达，再采用D—Ga1N／LPS联合诱导小鼠急性肝损伤，观察TLR4siRNA对D—GalN／LPS诱导的肝损伤小鼠是否有保护作用，观察TNF一、MIP一2水平的变化，观察肝细胞凋亡水平变化。结果

3、D—GalN／LPS联合给药前48h及24hTLR4siRNA预处理可明显降低ALT及AST的升高幅度，TNF一及MIP一2的mRNA及细胞因子水平亦被抑制，TUNEL阳性肝细胞百分率下降。TLR4siRNA预处理可明显减轻D—GalN／LPS对C57BL／6小鼠的肝损害作用，降低小鼠的死亡率。通过TLR4siRNA阻断TLR4表达可能有助于控制LPS炎性反应，防治肝损伤。结论通过本研究可望进一步阐明LPS／TLR4在急性肝衰竭发病机制中的作用，为今后从RNA角度治疗肝功能衰竭提供理论和实验依据。【关键词】TLR4siRNA；急性

4、肝损伤；小鼠中图分类号：R575文献标志码：A文章编号：1005—0809(2013)01—0008—09EffectofTLR4siRNAforPreventingAcuteLiverInjuryinMiceXUZhe，HUANGChang—xing，LIYu，WANGPing-zhong，RENGuang—li，ZHANGYan，LIUQing—quan，LIANJian—qi，JIAZhan-sheng，NIEQing-he，SUNYong—tao，BAIXue—fanCenterofDiagnosisandTreatmen

5、tofInfectiousDiseasesofPLA，TangduHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,ShanxiProvinceXi"an710038,China)【Abstract】ObjectiveAcuteliverfailureisanimportantclinicalsyndrome．Inrecentyears．advancesinthetreatmentofacuteliverfailureiSminimal。howtosolvethisfundamentalproble

6、mremainstobedone．MethodsInthecurrentstudy，wedesignedandconstructedTLR4siRNAexpressionvectorsbasedonpSilencer4．1一CMVneosiRNAexpressionvector．Afternvitrotransfectionexperiments。screenthreebetterexpressionvectorstofurthernvivoanimalexperiments．Byenzymedigestionandsequenc

7、ing，invitroevaluatetheinhibitionofTLR4mRNAandproteinexpressionlevelsofthetransfectedRAW264．7cels．furtherevaluatetheeffectsofTLR4siRNAonTNF一0【．MIP一2level，andontheroleofLPS—inducedmit0gen—activa【edproteinkinase(MAPK)signalingpathway．Afterthen，invivo作者单位：710038陕西西安，第四军医大

8、学唐都医院全军感染病诊疗中心通讯作者：徐哲，E—mail：xtbai2011@163．eom一8一透析与人工器官2013年3月(第24卷)第1期testusingthreeTLR4siRNAwithhighinhibitioneficiency．A