三步法分离纯化副干酪乳杆菌细菌素的初步研究.pdf

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1、巾回虐学c亟报2014，30(24)：316·320ChineseAgriculturalScienceBulletin三步法分离纯化副干酪乳杆菌细菌素的初步研究葛菁萍，辛星，王瑶，宋刚，平文祥(黑龙江大学生命科学学院／微生物省高校重点实验室，哈尔滨150080；农业微生物技术教育部工程研究中心，哈尔滨1505OO)摘要：为了提高副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)HDwy．1细菌素的分离纯化得率和活性。本研究主要利用三步法从副干酪乳杆菌HDwy一1发酵液中分离纯化得到抑茵物质副干酪乳杆菌细菌

2、素，分别采用硫酸铵沉淀、CMSepharoseFastFlow阳离子交换柱层析和SephadexG．75凝胶层析分离技术对副干酪乳杆菌HDwy．1产生的细菌素进行纯化。结果表明：细茵素得率为39．93％，比活为1．56x10AU／mg，是纯化前的2．87倍，得到的细菌素样品经Tricine．SDS．PAGE电泳出现清晰条带，大小约为72KDa。通过该方法可以较好的对副干酪乳杆菌的细菌素进行回收。该工作为研究茵体内细茵素的理化性质及其开发应用提供了理论基础。关键词：副干酪乳杆茵；细菌素；分离；纯化；Tricine．SD

3、S．PAGE中图分类号：Q93文献标志码：A论文编号：2014．0057APreliminaryStudyof“TheThree—stepMethod’’inPurificationofaBacteriocinfromLactobaciUusparacaseiGeJingping。，XinXing，WangYing，SongGang，PingWenxiang~(KeyLaboratoryofMicrobiology~CollegeofLifeScience，Heilon~iangUniversity，Harbin15

4、0080；2EngineeringResearchCenterofAgricuhuralMicrobiologyTechnology,MinbtryofEducationHeilon~iang，Harbin150500)Abstract：InordertoimprovetheyieldandactivityofbacteriocinproducedbyLactobacillusparacaseiHDwy一1．thepurificationofantibacterialsubstanceswasstudiedwitht

5、hethree—stepmethod．TheantibacterialsubstanceswereextractedandpurifiedbytheAmmoniumsulfateprecipitation．CMSepharoseFastFlowion—exchangechromatographyandSephadexG一75gelfiltration．Itisshownthatthefinalyieldofbacteriocinwas39．93％andthespecificactivitywas1．56x103AU／

6、mg．Thespecificactivitywasincreased2．87fold．Tricine-SDS-PAGEshowedthatitsmolecularweightwasabout72KDa．Themethodhadshowngoodresults，whichprovidedtheoreticalfoundationforphysicochemiealpropertyanddevelopmentofbacteriocin．Keywords：Lactobacillusparacasei；bacteriocin

7、；extraction；purification；Trieine—·SDS—-PAGE0引言热稳定并且是无修饰的肽段口；Ⅲ类细菌素包括分子细菌素是某些菌株核糖体产生的一类具有抑菌作量>30KDa且不耐热的蛋白质；Ⅳ类细菌素可与其他用的蛋白质或者多肽【“。通常分为四类：I类细菌素基团形成复杂的大分子化合物州。由于细菌素是与食分子量<5K．Da，带有特殊的氨基酸，细菌素中研究最品有关的许多微生物的天然产品，因此目前人们正在多的Nisin就属于这一类口；Ⅱ类细菌素为分子量小、对加强其作为天然防腐剂的使用。基金项目：国家自然

8、科学基金青年科学基金项目“酸菜发酵生态系统中细菌群落与代谢物组特征耦合机制”(31300355)；黑龙江省高等学校科技创新团队“农业微生物发酵技术”(2012tdO09)第一作者简介：葛菁萍，女，1972年出生，黑龙江齐齐哈尔人，教授，博士，研究方向：微生物学。通信地址：150080黑龙江省哈尔滨市黑龙江大学生命科学学院，E-maihgejin