一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌的凝集活性.pdf

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1、第21卷第3期大连水产学院学报VOI.21NO.32006年9月JOURNALOFDALIANFISHERIESUNIVERSITYSep.2006文章编号：1000-9957（2006）03-0251-04一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌的凝集活性111211刘晗，孔晶，熊川男，李伟，白雪芳，杜昱光（1.中国科学院大连化学物理研究所，辽宁大连116023；2.大连水产学院食品工程系，辽宁大连116023）摘要：采用血凝测试及血凝活性糖抑制测试方法，测定了一种可降解黄原胶的鞘氨醇单胞菌XT-112+Sphingomonassp.对红细胞的凝集活性及糖抑制专一性，同

2、时进行了温度、pH及Ca对红细胞凝集6活性影响的试验。结果表明：XT-11菌悬液能凝集家兔、家鸡两种红细胞，其凝集效价分别为2和42+2；菌悬液对兔红细胞的凝集作用可以被肝素所抑制；鞘氨醇单胞菌的凝集活性不依赖于Ca，且在pH为6.0~10.0时较稳定，在温度为60C时完全丧失凝集活性。这说明该菌含有能凝集红细胞的活性物质。关键词：黄原胶；鞘氨醇单胞菌；红细胞；凝集活性中图分类号：@939.99文献标识码：A［1］鞘氨醇单胞菌XT-11Sphingomonassp.是一种新发现的可专一性降解黄原胶的细菌，具有一定的工业应用前景。关于细菌可以凝集红细胞的研究已有报

3、道，如Brucellasp.是一种革兰氏阴性菌，［2］它可以凝集人血红细胞，可使哺乳动物和人传染上地中海热并导致死亡。另一种革兰氏阴性菌人［3］胃幽门螺旋杆菌Helicobacterpylori也可凝集人血红细胞。红细胞凝集活性测试方法广泛用于鉴定一些细菌致病过程中的“锁钥”结构。动物红细胞的表面存在着各种各样的糖蛋白和糖脂，因而使其［4］成为一种用于鉴别细菌粘附类型的工具。本试验中，笔者采用血凝试验和血凝糖抑制试验，测定2+了鞘氨醇单胞菌XT-11菌悬液对人和动物红细胞的凝集活性，以及温度、pH及Ca对菌悬液凝集活性的影响，旨在了解该细菌的粘附类型，为深入开展

4、细菌凝集素分子水平的研究提供依据。!"材料和方法!#!"材料试验用菌种系从大连湾滩涂中分离得到的，为兼性厌氧菌。人的B型血样和小鼠由大连医科大学提供，动物血样取自大连市长兴农贸市场。试剂黄原胶、酵母浸出粉、琼脂粉、蛋白胨、胰蛋白酶均为美国Sigma公司的产品，其它试剂均为国产分析纯。!#$"方法1.2.1TBS红细胞悬浮液的制备血样均取全血，用38g/L的枸橼酸钠溶液抗凝，各抗凝血经2000r/min离心10min除去血浆，加入10倍体积的TBS溶液充分洗涤，然后离心3min（1000r/min），去上清液，重复4次。最后以2500r/min离心3min，一部分

5、配成2%（体积分数，下同）的TBS-2+2+Ca红细胞悬浮液；另一部分配成不含Ca的2%的TBS红细胞悬浮液。将红细胞悬浮于10mL的TBS中，加入2mg胰蛋白酶，在37C下消化1.51。然后用TBS液清洗3次，在TBS中配成2%的红细胞悬浮液。1.2.2菌悬液的制备将菌种接种于黄原胶固体培养基上，于恒温培养箱（30C）中培养1~2d，2+待新生菌体长出后，用TBS-Ca溶液（TBS：0.14mOI/LNaCI，0.01mOI/LTris-HCI，pH=7.4；2+TBS-Ca：TBS中含0.01mOI/LCaCI2，pH=7.4）清洗菌落制成菌悬液。收稿日期：

6、2005-07-18基金项目：辽宁省自然科学基金资助项目（2050885）；辽宁省教育厅资助项目（05L086）作者简介：刘晗（1981-），男，硕士生。通讯作者：李伟，男，博士，教授。E-maiI：aisingiOrO@dIfu.edu.cn252大连水产学院学报第21卷黄原胶固体培养基的组成为：琼脂粉2%，蛋白胨0.1%，酵母浸出粉0.1%，黄原胶0.3%，葡萄糖0.2%，水97.3%（均为质量分数）。1.2.3血凝活力的测定活力测定在96孔U型微量血凝板中进行。每孔中先加入25!L的TBS-2+Ca溶液，再往第1孔中加入25!L样品，混匀后，再从第1孔中吸

7、取25!L上述混合液加入到第22+孔中，以此类推作倍比稀释，最后在每孔中加入25!L体积分数为2%的TBS-Ca红细胞悬浮液，振荡摇匀，在室温下放置1~21后，肉眼观察。若红细胞不发生凝集，则其在“U”型血凝板小孔内沉于孔底并形成一界线清晰的红色小点；若发生凝集，红细胞之间则形成一似网络扩散的红斑块。n2+以有红细胞凝集活力的最大稀释度为该凝集素样品的凝集活力（凝集效价），记为2，以TBS-Ca作空白对照。1.2.4糖的抑制试验选取16种单糖、寡糖和糖蛋白，分别制成浓度为200mmOI/L的溶液。往每一孔中加入25!L糖溶液，然后加入25!L菌悬液，再加入25!

8、L体积分数为2%的兔红细