双向电泳技术服务流程

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1、双向电泳技术服务流程广州辉骏生物科技有限公司[GUANGZHOUFITGENEBIOTECHNOLOGYCO.,LTD]辉骏生物双向电泳技术服务流程双向电泳(two-dimensionalelectrophoresis)：一种平板电泳技术，样品各组分先在第一方向分离(对蛋白质常用等电聚焦法)，然后在与第一方向成90的第二方向作电泳分离(常用聚丙烯酰胺凝胶电泳法)，是蛋白质组学中的重要研究手段之一。下面简单介绍下我们的双向电泳技术服务流程：双向电泳技术服务流程：1.预实验：客户先提供一定的样本，我公司技术人员提取蛋白后先做1张银染的双向电泳胶(24cm)用于观察和优化

2、实验，客户如对预实验结果满意，方可继续进行实验，预实验胶仍然按常规标准收费；如对预实验不满意，则可放弃实验，我公司不收取任何费用；2.签订合同，寄送发票，支付预付款（预实验费用+跑胶费用的一半）；3.正式实验：保证与预实验的效果相当。4.差异点分析：我公司免费为客户作一次差异点分析（例如有5组样本，我公司负责做5组免费分析，其余每组分析收费300元）。5.提交给客户带有水印的实验结果图，以便于评估实验效果。寄送发票，客户需支付剩余的跑胶费用以及质谱鉴定预付款（鉴定费用的一半）。6.我公司提交全部的双向电泳图及蛋白差异分析图。7.挖点酶切：客户可从所有的差异点中自主选

3、择感兴趣的点进行后续鉴定。由于银染胶的上样量很低，不利于鉴定，因此建议客户再做2张考染胶用于质谱鉴定，如果样本数很多，也可能需要增加鉴定胶的数目，具体情况可协商确定。8.质谱鉴定：质谱仪型号为Autoflexspeed™MALDI-TOF-TOF（BrukerDalton），扫描质量范围为700-3200Da。9.蛋白检索：免费为客户进行串联质谱数据的蛋白质数据库检索，软件为Mascot。根据是否有蛋白超过软件本身给定的阈值，来判断鉴定成功与否，鉴定不成功的点不收费（有检索结果的模板可供参考）。10.统计鉴定成功斑点的个数，寄送发票，客户需支付质谱鉴定余款；11.收

4、到全款后，我公司会提交全部的实验数据和实验报告。12.售后服务：如客户在论文写作过程中碰到任何技术问题，可咨询我公司技术人员。双向电泳实验流程：辉骏生物双向电泳技术服务流程1.蛋白提取和纯化；2.蛋白定量：Bradford法；3.IEF上样；4.干胶条泡胀；5.等电聚焦：等电聚焦仪(GEETTANIPGPHOR3)；6.胶条保存；7.SDS-PAGE灌胶：胶的规格为24cm长×19cm高×1mm厚；8.胶条平衡；9.二向垂直电泳：电泳槽GEETTANDALTsix；10.染色；11.扫描：扫描仪UMAXPowerlook1100，扫描模式为256灰阶透视扫描，分辨率

5、为150dpi；12.图像分析：分析软件为ImageMaster2Dplatinum5.0(GE)；13.质谱前处理；14.质谱检测：Autoflexspeed™MALDI-TOF-TOF（BrukerDalton），UV波长为355nm，重复速率为200HZ，加速电压为20000V，最优质量分辨率为1500Da，质量范围为700-3200Da；15.数据库检索：利用Matrixscience公司的Mascot软件。送样注意事项：1.干冰或低温冰箱降温速度缓慢，样本直接放进冰箱或干冰中容易引起降解。从活体上取下来的组织应在15min内用液氮浸没迅速降温，样本（尤其是

6、内脏组织）不要在生理盐水中过久地漂洗。一些极易降解的组织（如胰腺）应在尽可能短的时间内放入液氮。彻底冷冻后的样本再转移到其他保存环境中。2.样本量：每组至少准备500mg组织，对于蛋白含量较低的组织，应适当增加送样量。样本运输：1.运输条件若寄送的样本为组织、细胞、细菌或蛋白溶液等，应封存好后用干冰中运输。注意干冰一定足量，样本要深埋，并封紧冰盒，以免干冰挥发过快导致样本解冻、蛋白降解。辉骏生物双向电泳技术服务流程2.标记清楚样本一定要做好标记，应用油性防冻记号笔或标签纸在管上注明样本名称或编号、收集时间等，再用一层透明胶带封好，以免有机溶剂模糊字迹或标签纸掉落。尽

7、可能简化标记、方便区分和识别。3.样本封存放置样本的EP管应用封口膜封紧，用装在密实封口袋中，防止样本泄露。如样本过多需要用到多个封口袋，最好在封口袋上也写明装入本袋的样本名称或编号，便于技术人员识别和保存。希望以上信息对大家有帮助，感谢阅读，祝实验顺利！